Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC

7/24/2019 Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC

1/14

Penentuan Morfin dalam Urin dengan Metode Chromatography yaitu

Metode GC-MS dan Metode HPLC.

A. Pengertian Morfin

Morfin adalah candu analgesik obat psikoaktif kuat (Gambar. 1). Ini

adalah analgesik opioid kuat. Dalam pengobatan klinis, morfin dianggap

sebagai standar emas analgesik. Hal ini digunakan untuk pengobatan jangka

pendek neri pasca operasi dan dalam jangka panjang untuk menghilangkan

rasa sakit pasien kanker.

Morfin juga merupakan !at ang berpotensi sangat adiktif. Hal ini dapatmenebabkan ketergantungan psikologis dan ketergantungan fisik serta

toleransi. "leh karena itu, penggunaan ekstensif dari morfin sebagai analgesik

serta penalahgunaan luas obat ini diperlukan pengembangan metode

sederhana, cepat dan dapat diandalkan untuk mendeteksi obat ini pada sampel

biologis.

#anak metode ang telah dikembangkan untuk penentuan morfin dalam

cairan biologis. Ini termasuk metode berdasarkan kinerja tinggi massa

kromatografi cair spektrometri (H$%&'M), kinerja tinggi kromatografi cair

tandem mass spectrometr (H$%&'M M), ultra'tinggi'tekanan cairan

kromatografi'tandem mass spectrometr (H$%&'M' M) dan kromatografi

gas spektrometri massa (G&M). *amun, fase terbalik kromatografi cair

kinerja tinggi (+$'H$%&) dengan detektor - sering digunakan untuk

analisis morfin sejak spektrometri massa kromatografi gas (G&M) tetap

standar emas untuk obat skrining penalahgunaan konfirmasi dalam cairan

biologis (/hang, 012)

Morfin merupakan agonis reseptor opioid, dengan efek utama mengikat

dan mengakti3asi reseptor-opioidpada sistem saraf pusat. 4kti3asi reseptor

ini terkait dengan analgesia, sedasi, euforia,

physicaldependencedanrespiratory depression. Morfin juga bertindaksebagai agonis reseptor 5'opioid ang terkait dengan analgesia spinal dan

miosis.

Di dalam tubuh, morfin terutama dimetabolisme menjadi morphine-3-

glucuronidedan morphine-6-glucuronide(M6G). $ada he7an pengerat, M6G

tampak memiliki efek analgesia lebih potensial ketimbang morfin sendiri.

edang pada manusia M6G juga tampak sebagai analgesia. $erihal

signifikansi pembentukan M6G terhadap efek ang diamati dari suatu dosis

morfin, masih jadi perdebatan diantara ahli farmakologi ("morgui, 1889).
http://en.wikipedia.org/wiki/Opioidhttp://en.wikipedia.org/wiki/Dependencehttp://en.wikipedia.org/wiki/Dependencehttp://en.wikipedia.org/wiki/Respiratory_depressionhttp://en.wikipedia.org/wiki/Respiratory_depressionhttp://en.wikipedia.org/wiki/Morphine-6-glucuronidehttp://en.wikipedia.org/wiki/Morphine-6-glucuronidehttp://en.wikipedia.org/wiki/Dependencehttp://en.wikipedia.org/wiki/Respiratory_depressionhttp://en.wikipedia.org/wiki/Morphine-6-glucuronidehttp://en.wikipedia.org/wiki/Opioid


2/14

B. Pengertian Metode GC-MS dan HPLC

1. Pengertian Metode GC-MS:romatografi gas'spektrometer massa (G&'M) adalah metode

ang mengkombinasikan kromatografi gas dan spektrometri massa untuk

mengidentifikasi sena7a ang berbeda dalam analisis sampel.

:romatografi gas dan spketometer masa memilki keunikan masing'

masing dimana keduana memiliki kelebihan dan kekurangan. Dengan

menggambungkan kedua teknik tersebut diharapkan mampu meningkatkan

kemampuan dalam menganalisis sampel dengan mengambil kelebihan

masing'masing teknik dan meminimalisir kekuranganna (Douglas, 1886).

2. Prinip !er"a Metode GC-MS$rinsip :erja G&'M adalah terdiri dari dua blok bangunan utama;

kromatografi gas dan spektrometer massa . :romatografi gas

menggunakan kolom kapiler ang tergantung pada dimensi kolom itu

(panjang, diameter, ketebalan film) serta sifat fase (misalna


3/14

campuran.ampel ang akan dianalisis dijadikan dalam 3olume ang kecil

dari fase bergerak dan diubah melalui reaksi kimia oleh fase diam ketika

sampel melalui sepanjang kolom. ?ujuan penggunaan alat ini adalah

mengetahui kadar asam organic (#asset, 1889).

$. Prinip !er"a Metode HPLC

$rinsip kerja dari alat H$%& adalah ketika suatu sampel ang akan

diuji diinjeksikan ke dalam kolom maka sampel tersebut kemudian akan

terurai dan terpisah menjadi sena7a'sena7a kimia ( analit ) sesuai

dengan perbedaan afinitasna. Hasil pemisahan tersebut kemudian akan

dideteksi oleh detector (spektrofotometer -, fluorometer atau indeks

bias) pada panjang gelombang tertentu, hasil ang muncul dari detektor

tersebut selanjutna dicatat oleh recorder ang biasana dapat ditampilkan

menggunakan integrator atau menggunakan personal computer ($&) ang

terhubung online dengan alat H$%& tersebut (#asset, 1889).

C. !euntungan dan !erugian Metode GC-MS dan Metode HPLC

1. Metode GC-MS

!eunggulan dari metode ini adalah e%agai %eri&ut '

a) @fisien, resolusi tinggi sehingga dapat digunakan untuk menganalisa

partikel berukuran sangat kecil seperti polutan dalam udara

b) 4liran fasa bergerak (gas) sangat terkontrol dan kecepatanna tetap.

c) $emisahan fisik terjadi didalam kolom ang jenisna banak sekali,

panjang dan temperaturna dapat diatur.

d) #anak sekali macam detektor ang dapat dipakai pada kromatografi gas

(saat ini dikenal 12 macam detektor) dan respons detektor adalah

proporsional dengan jumlah tiap komponen ang keluar dari kolom.

e) angat mudah terjadi pencampuran uap sampel kedalam fasa bergerak.

f) :romatograf sangat mudah digabung dengan instrumen fisika'kimia ang

lainna, contohna G&A?'I+M.g) 4nalisis cepat, biasana hana dalam hitungan menit.

h) ?idak merusak sampel.

i) ensiti3itas tinggi sehingga dapat memisahkan berbagai sena7a ang

saling bercampur dan mampu menganalisa berbagai sena7a meskipun

dalam kadarkonsentrasi rendah. eperti dalam udara, terdapat berbagai

macam sena7a ang saling bercampur dan dengan ukuran

partikelmolekul ang sangat kecil.

!e&urangan dari metode ini adalah e%agai %eri&ut '

a) ?eknik :romatografi gas terbatas untuk !at ang mudah menguap


4/14

b) :romatografi gas tidak mudah dipakai untuk memisahkan campuran

dalam jumlah besar. $emisahan pada tingkat mg mudah dilakukan,

pemisahan pada tingkat gram mungkin dilakukan, tetapi pemisahan dalam

tingkat pon atau ton sukar dilakukan kecuali jika ada metode lain.

c) Aase gas dibandingkan sebagian besar fase cair tidak bersifat reaktif

terhadap fase diam dan !at terlarut.

2. Metode HPLC

!eunggulan dari metode HPLC '

a) %ebih teliti

b) udah digital sehingga penggunaanna cepat dan lebih praktis

c) mampu memisahkan molekul'molekul dari suatu campuran

d) mudah melaksanakanna

e) kecepatan analisis dan kepekaan ang tinggi

f) dapat dihindari terjadina dekomposisi kerusakan bahan ang

dianalisis

g) +esolusi ang baik

h) dapat digunakan bermacam'macam detector

i) :olom dapat digunakan kembali

j) mudah melakukan sample reco3er

!erugian dari metode HPLC '

a) %arutan harus dicari fase diamna terlebih dulub) Hana bisa digunakan untuk asam organic

c) Harus mengetahui kombinasi ang optimum antara pelarut, analit, dan

gradien elusi

d) Hargana mahal sehingga penggunaanna dalam lingkup penelitian

ang terbatas

(. Proe Analii Morfin (engan Metode GC-MS dan Metode HPLC

1. Metode GC-MS

a. Persiapan sampel.

olusi saham standar primer morfin (1 ug m%) dan kodein (1

ug m%) secara terpisah disiapkan dalam 1 ml labu 3olumetrik

dengan urineB 1= *a"H ditambahkan tetes demi tetes sampai pH

8,'8,0 tercapai, dan 1.m% larutan boraks penangga ditambahkan.

ntuk ini, 2ml pelarut ekstraksi (etil asetat) ditambahkan dan 3orteC

dicampur pada 3orteCer untuk 0, menit, diikuti dengan sentrifugasi

pada 2 r min untuk


5/14

propionat dan 0 u% piridin. emua reagen ang 3orteC'campuran,

maka pemanasan untuk 2 menit di & dan dikeringkan di ba7ah

streamat udara 6 &. +esidu kering dilarutkan dalam


6/14


7/14

e. Prosedur Validasi

:ur3a kalibrasi urin disiapkan dan diuji dalam rangkap tiga

hari ang berbeda untuk mengamati linearitas, presisi, akurasi,pemulihan, batas kuantitasi (%"F), batas deteksi (%"D),

selekti3itas dan stabilitas. $erbandingan luas puncak kromatografi

morfin untuk codeine digunakan dalam kuantifikasi tersebut.

). Hail Analii Morfin (engan Metode GC-MS dan Metode HPLC.

1. Metode GC-MS

Gambar 0 menunjukkan kromatogram khas sampel urin kosong

dibubuhi morfin dan kodein. ?idak ada campur !at endogen ang diamati

pada 7aktu retensi dari morfin dan kodein. :ur3a kalibrasi untuk morfindan kodein ang dihasilkan oleh regresi linear dari rasio luas puncak

terhadap konsentrasi, persamaan regresi respecti3el. ?he untuk plot

kalibrasi ang N 00K.8O 00,2 dengan N ,88K9 untuk morfin (

adalah area puncak analit, dan adalah konsentrasi analit dalam urin

manusia), dan konsentrasi berada di kisaran 0


8/14

?abel 0; +ingkasan stabilitas morfin dan kodein dalam berbagai kondisi

penimpanan (N 2).

rentang ang dapat diterima dan metode ini akurat dan tepat. $emulihan morfin

dan kodein die3aluasi dengan membandingkan rasio daerah puncak diekstraksi

sampel F& dengan orang'orang dari referensi solusi F& dilarutkan dalam ekstrak

urin kosong. $emulihan berarti morfin dan kodein ang lebih baik dari K


9/14

:ur3a kalibrasi dibangun dengan memplot rasio luas puncak

morfin terhadap kodein. :ur3a kalibrasi untuk morfin adalah linear pada

rentang konsentrasi 1


10/14

Gambar.


11/14

akurat (sesuai pedoman AD4) dalam mengukur konsentrasi morfin ini di kisaran

konsentrasi bunga.

?abel 1; $resisi dan akurasi metode untuk penentuan morfin dalam urin manusia

?abel 2; studi tabilitas morfin

$enerimaan dihitung sebagai persentase dari daerah rasio diekstraksi

dengan sampel terekstraksi. $enerimaan morfin ber3ariasi dari


12/14

#atas deteksi (%"D) adalah konsentrasi terendah dari analit dalam sampel

ang dapat dideteksi tetapi tidak harus kuantitatif menilai, di ba7ah kondisi

percobaan menatakan. #atas kuantifikasi (%"F) didefinisikan sebagai

konsentrasi plasma terendah dalam kur3a kalibrasi ang dapat diukur secara rutin

dengan presisi ang baik (+D P0=) dan akurasi ('10=). Dalam penelitian

ini, %"D dalam metode ini adalah


13/14

?abel 1; $resisi dan akurasi metode untuk penentuan morfin dalam urin manusia

dengan Metode H$%&.

#erdasarkan kedua tabel tersebut. Dapat diketahui bah7a presisi dan

akurasi dari kedua metode tersebut berbeda dengan konsentrasi berbeda pula.

*amun, metode H$%& mempunai tingkat presisi dan akurasi ang lebih tinggi

daripada metode G&'M dalam penentuan adana morfin. Dapat dilihat dengan

tingkat presisi tertinggi dari metode H$%& adalah 10.


14/14

(A*+A, PUS+A!A

#asset, ., et al., 1889,Buku Aar Vogel Analisis unatitatif Anorganik. akarta,

@.G.&.$enerbit #uku :edokteran

Douglas 4., Jest, Donald M., dan Holler, A. ames, 1886, Analytical hemistry,

aunders &ollege $ublishing, 4merika.

"morgui, ., 188K,Buku /aku 0bat-obatan Anastesi, @disi II, @G&, akarta.

+u!ila7at, 4.#., et al.* 012, Determination of Morphine in Human rine b 4

imple +e3erse $hase High'$erformance %i>uid &hromatograph

Method 7ith - Detection, 1nternational 2ournal ofPharmaceutical /ciences and rug 4esearch, ol. / 0o. 1/

ni3ersiti ains Malasia, :elantan, Malasia

/hang, ., et al., 012, Determination of Morphine and &odeine in Human rine

b Gas &hromatograph'Mass pectrometr, 2ournal of Analytical

Methods in hemistry, &hina.

Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC

Documents

Penentuan Morfin Dalam Urin Dengan Metode Chromatography GC