Induksi nekrosis sel lemak dalam jaringan lemak manusia setelahpengobatan dengan fosfatidilkolin dan deoxycholate

AbstrakLatar Belakang Suntikan dengan zat-fosfatidilkolin dan deoxycholate mengandung digunakan untuk mengobati lokal lemak akumulasi dan lipoma. Hal ini diyakini bahwa zat disuntikkan menginduksi kerusakan sel lemak dengan panniculitis akut selanjutnya diikuti dengan proses perbaikan jaringan lemak diobati. Tujuan Kami menyelidiki apakah nekrosis atau apoptosis sel-sel lemak diinduksi oleh zat disuntikkan. Metode Sampel dari jaringan lemak dari lipoma dikumpulkan pada berbagai waktu setelah injeksi dan dievaluasi oleh cahaya dan mikroskop elektron, dengan immunostaining untuk aktif caspase-3 dan antideoxyribonuclease I, di situ akhir pelabelan (TUNEL pewarnaan), dan caspase-3 biokimia tes. Hasil Light dan mikroskop elektron menunjukkan nekrosis sel lemak di seluruh wilayah di lipoma diobati. Rendahnya tingkat aktif caspase-3 menunjukkan tidak adanya apoptosis. Kesimpulan Injeksi dari fosfatidilkolin zat lipolitik dan deoxycholate menyebabkan nekrosis sel lemak bukan apoptosis. Namun, penelitian tambahan mengevaluasi dosis yang berbeda dan titik waktu yang lebih lanjut setelah pengobatan diperlukan.

PengenalanInjeksi lipolisis, juga disebut lipo-larut atau lemak larut, menjelaskan prosedur dalam kedokteran estetika yang bertujuan untuk pengurangan lokal lemak akumulasi dengan suntikan intralesi zat yang menginduksi kerusakan sel lemak. Yang paling sering produk yang digunakan terutama terdiri dari fosfatidilkolin (PC) dan natrium deoxycholate (DC) .1 Ia telah mengemukakan bahwa tidak ada enzimatik jalur lipolitik diinduksi oleh pengobatan ini, tetapi mengurangi volume setelah PC dan DC suntikan kemungkinan disebabkandengan efek deterjen DC.2, 3 Studi tentang lipoma manusia telah menunjukkan bahwa injeksi PC dan DC menyebabkan kerusakan sel lemak, dengan panniculitis selanjutnya diikuti dengan reaksi fibrosis dari lemak, diperlakukan tissue.4 5 Pada awalnya, sebuah supuratifperadangan hadir, terdiri dari granulosit neutrophilic. Selama fase akut tingkat TNF-a, IL-4, IL-6, IL-8 dan IL-10 yang elevated.6 Para granulosit neutrophilic adalah kemudian digantikan oleh menyusup limfosit, yang akhirnya digantikan dengan granuloma lipophage, sel busa dan fibrosis.4 Meskipun reaksi kronologis yang terjadi di jaringan lemak manusia setelah injeksi lipolisis telah dijelaskan, kerusakan awal untuk manusia adipocytes belum substansial diselidiki. Oleh karena itu kami bertujuan untuk mengevaluasi apakah PC / DC suntikan menyebabkan sel lemak nekrosis atau apoptosis untuk lebih memahami mekanisme ini intervensi.

Bahan dan metode

Pasien

Sepuluh subyek (usia: 23a € "36 tahun, 6 #, 4 $) dengan beberapa keluarga lipomatosis yang terdaftar dalam studi. Lipoma diobati dengan suntikan intralesi tunggal Lipostabil (Nattermann, Cologne, Jerman) (kisaran volume: 1A € "3,5 mL). Substansi digunakan untuk injeksi mengandung campuran PC dan DC. Sebanyak 24 biopsi sampel dievaluasi, dengan 14 sampel dari diperlakukan lipoma dipotong 48 jam setelah injeksi dan 10 dari lipoma tidak diobati melayani sebagai kelompok kontrol. Empat dari 14 sampel biopsi lipoma itu diperlakukan diambil dari klinis cukup terpengaruh jaringan lemak, sisanya 10 dari jaringan sangat dipengaruhi, seperti ditunjukkan oleh warna kecoklatan. Selama lima pasien ini, kami mampu untuk melakukan studi longitudinal: kita mengumpulkan sampel di setelah titik waktu: 4 jam, 10 jam, 24 jam, 48 jam dan 10 minggu setelah injeksi. Semua pasien dan relawan memberikan persetujuan mereka. Studi 1 telah disetujui sesuai dengan Deklarasi Helsinki.

Cahaya mikroskop dan immunostaining melawan aktif caspase-3 dan DNase I

Sampel dari lipoma dipotong difiksasi dalam 10% (b / v) paraformaldehyde dilarutkan dalam fosfat-buffer saline (PBS) selama 24 jam dan kemudian ditanam dalam parafin, belah dan diwarnai dengan hematoksilin / eosin (HE). Deteksi imunohistokimia aktif caspase-3 adalahdicapai dengan afinitas-dimurnikan kelinci IgG (R & D Systems, Wiesbaden, Jerman, tidak ada katalog. AF835), yang mengikat subunit p17 caspase-3 manusia aktif. Demikian pula, bagian diwarnai dengan anti-DNase monoklonal I (deoxyribonuclease I) antibodisebagai described.7 Bagian adalah deparaffinized, direhidrasi dan, setelah dicuci dalam PBS, diblokir dengan kambing 10% serum pada PBS. Setelah inkubasi dengan antibodi primer paling sedikit 12 jam pada 4? C, antibodi tidak terikat dihilangkan dengan mencuci slide limakali dengan PBS. Selanjutnya, bagian diinkubasi dengan antibodi sekunder spesifik untuk antibodi primer (kambing antirabbit) ditandai untuk fosfatase alkali. Para chromogen Baru fuchsin (DAKO, tidak ada kode. K596) dipekerjakan untuk visualisasi, mengakibatkan reaksi fuchsia berwarna larut product.8 Counterstaining dicapai dengan hijau cepat, yang noda sitoplasma.

TUNEL Pewarnaan

Untuk terminal transferase deoxyribonucleotidyl dUTP nick endlabelling(TUNEL), bagian jaringan yang direhidrasi permeabilized dengan 0,5% (b â "v) pepsin dilarutkan dalam HCl 0,01 M selama 10 menit pada 37 C, dan peroksidase endogen telah dipadamkan oleh 3% (v â "v) H2O2 dilarutkan dalam metanol selama 5 menit pada RT. Pelabelan dari OHends ¢ 3a dengan nukleotida terbiotinilasi menggunakan terminal deoxyribonucleotidyl transferase (TDT) dilakukan dengan TDT dalam kit situ dariR & D Systems. Deteksi nukleotida dimasukkan dicapai menggunakan streptavidinâ € "kompleks biotin konjugasi lobak peroksidase, mempekerjakan 3-amino-9-ethylcarbazole (AEC) sebagai chromogen substrat (Dako Cytomation, Hamburg, Jerman). Untuk memverifikasi fungsionalitas dari prosedur, kontrol positif dilakukan setelah pretreatment dari bagian dengan 10 lg â "mL dimurnikan sapi pankreas DNase 1,9 bagian Stained

diperiksa menggunakan mikroskop cahaya, dan difoto dengan Axio- Cam HRC kamera digital menggunakan AxioVision 3.0 software (Zeiss, Goa ¨ ttingen, Jerman).

Mikroskop Elektron

Semua sampel biopsi dari lipoma difiksasi dalam glutaraldehid 2,5% dan 2% paraformaldehyde di Na2HPO4 0,1 M / NaH2PO4 pada pH 7,0 untuk 2 hingga 4 jam. Postfixation dilakukan pada ferri osmium 1% selama 2 jam. Sampel kemudian didehidrasi dengan etanol dinilai dan tertanam dalam Epon (Serva, Heidelberg, Jerman) dengan propilenoksida sebagai media perantara. Slides dari 60 sampai 70 nm ketebalan yang terpasang pada Formvar berlapis grid tembaga (Plano, Wetzlar, Jerman). Bagian ultrathin diwarnai dengan uranil 1% asetat dan 0,66% sitrat utama (10 menit masing-masing) dan diperiksa di80 kV dengan mikroskop elektron 420 EM Philips (Philips; Eindhoven, Belanda). Gambar dievaluasi dengan memperhatikan dengan karakteristik nekrosis atau apoptosis.

Analisis aktivasi caspase-3 oleh alat tes biokimia dan imunobloting

Sampel biopsi juga dianalisis menggunakan uji biokimia caspase-3 sebagai indikator apoptosis. Biopsi sampel donor dicuci dengan PBS, kembali ditangguhkan dalam 5 mM Tris-HCl, pH 8,0 dan 5 mM dan dithiothreitol terganggu oleh tiga siklus pembekuan dan pencairan. Homogenat disentrifugasi selama 20 menit pada 17 530 g, dan konsentrasi protein dari supernatan (â € ~ kecepatan tinggi homogenatesâ € ™) diukur seperti yang dijelaskan oleh Bradford. 10 Untuk assay enzim caspase-3 fluorogenic, 30 lg ini Glu-Val-Asp-7-amido-4-methylcumarin diperoleh dari Alexis, Gru ¨ nberg, Jerman) dilarutkan dalam 600 lL 20 HEPES-OH pH mM, 7,5 gliserol, 10%, dan 5 mM DTT selama 5 jam pada 37 C. AMC rilis ditentukan dengan mengukur peningkatan fluoresensi dengan eksitasi dan emisi panjang gelombang 380 nm dan 460 nm, masing-masing, menggunakan Shimadzu RF 5001-PC spectrofluorophotometer sebagai dijelaskan oleh Stolzenberg aktivitas al.11 et caspase-3 spesifik dievaluasi dengan melakukan pengukuran tambahan di hadapan spesifik tetrapeptide DEVD caspase-3 menghambat (Ac-Asp-Glu-Val-Asp) pada 25 lM

Hasil

Light-mikroskopis pengamatan HE-dan anticaspase-3 pewarnaan

Semua sampel mengalami standar HE-dan immunostaining untuk aktif caspase-3 (Gambar 1), di samping itu, semua sampel menjadi sasaran untuk TUNEL, anti-DNase I dan Hoechst 33342 pewarnaan (Gbr. 3). Khas hasil untuk pewarnaan HE caspase-3 dan antiactive dari satu kontrol dan biopsi beberapa studi longitudinal ditunjukkan pada Gambar. 1. HE-pewarnaan menunjukkan adipocyte penyusutan dan kerusakan mulai dari 10 jam dan berlangsung hingga 48 jam setelah injeksi (panah kepala pada Gambar. 1c-d). Para antiactive caspase-3 pewarnaan negatif untuk bagian kontrol (Gbr. 1a ¢), tapi 4 jam setelah pengobatan kami mendeteksi sel endotel positif bernoda kecil pembuluh (panah pada Gambar ¢ 1b.). Sesekali kami juga mengamati positif adipocytes patri, seperti yang ditunjukkan dalam sampel diambil 48 jam setelah injeksi (panah pada Gambar. ¢ 1e). Namun, sebagian besar adipocytes masih negatif untuk aktif caspase-3 (Gambar 1).

Biokimia analisis untuk aktif caspase-3

Untuk memverifikasi kurangnya aktivasi caspase-3 setelah injeksi Lipostabil, kita diuji homogenat jaringan untuk caspase-3 kegiatan dalam ketiadaan atau kehadiran caspase-3-spesifik tetrapeptide hambat DEVD. Menggunakan prosedur yang rinci dalam Bahan dan metode, kita tidak mendeteksi adanya peningkatan yang signifikan dalam spesifik caspase-3aktivitas di lipoma diperlakukan (Gambar 2a). Hasil ini lebih lanjut

Gambar 1 Hematoksilin â "eosin (HE) dan pewarnaan imunohistokimia untuk aktif caspase-3 bagian dari parafin-embedded sampel lipoma sebelum dan setelah injeksi Lipostabil, dipotong pada titik waktu yang ditunjukkan dalam margin kiri. HE-pewarnaan (aa € "f) dan sesuai antiactive caspase-3 pewarnaan (aa ¢ â €" fa ¢). Untuk rincian, lihat teks. Bar sesuai dengan 100 lm.

didukung oleh Western blotting homogenat lipoma menggunakanantibodi terhadap caspase-3 aktif dan pro-caspase-3. Data diperoleh jelas menunjukkan tidak adanya 17 - dan 11 kDa khas aktif caspase-3 immunoreactive band (Gambar 2b) tetapi kegigihan dari band 35-kDa khas tidak aktif procaspase-3 (Gbr. 2).

Gambar 2 analisis biokimia untuk caspase-3 aktivasi diukur dalam homogenat jaringan sampel lipoma. (a) Hasil diperoleh dengan menggunakan analisis fluorometric DEVD-AMC sebagai substrat (lihat Bahan dan metode) dalam ketidakhadiran (kolom biru) atau kehadiran spesifik caspase-3 inhibitor (kolom merah). Pasangan pertama kolom mewakili sampel sebelum (C = kontrol), dan yang lain mewakili sampel yang dikumpulkan 48 jam setelah, Lipostabil injeksi. (b) sampel Identik dikenakan imunoblotting menggunakan antibodi caspase-3 antiactive. Perhatikan kehadiran band immunoreactive dari 35 kDa pada semua sampel, sesuai dengan, uncleaved tidak aktif yaitu procaspase-3. diposisi dari produk disosiasinya pro-caspase- 3 menyebabkan aktivasi caspase-3 (17 kDa dan 11 kDa sebagaiditunjukkan dengan posisi dari massa molekul prestained penanda; M), tidak ada band immunoreactive yang terdeteksi.

TUNEL dan Pewarnaan anti-DNase I

Tidak adanya aktivasi caspase-3 setelah injeksi Lipostabil adalah kontras dengan pewarnaan TUNEL positif adipocyte banyak inti setelah perawatan ini (Gbr. 3). TUNEL-positif adalah inti terdeteksi setelah hanya 4 jam (Gambar 3b), dan setelah 10 jam hampir semua adipocyteinti adalah TUNEL-positif (Gambar 3c). Setelah itu, mutlak jumlah dan proporsi TUNEL-positif inti muncul menurun hingga 48 jam, dan 10 minggu setelah injeksi yang tersisa atau sel lemak baru yang dihasilkan sekali lagi TUNEL-negatif (Gambar 3f). Negatif dan positif kontrol dari prosedur TUNEL (lihat Bahan dan metode) dilakukan untuk setiap titik waktu,menunjukkan spesifisitas reaksi (data tidak ditunjukkan). Pewarnaan TUNEL positif tidak secara eksklusif menunjukkan apoptosis kematian sel. Memang, telah berulang kali menunjukkan bahwa nekrotik kematian sel menyebabkan staining.12 TUNEL positif karena itu kita dilakukan immunostaining untuk deoxyribonuclease I (DNase I) karena telah menyarankan bahwa endonuklease utama yang mempengaruhi

Gambar 3 TUNEL, anti-DNase I dan (f) (f ') (f'') nuklir Hoechst 33342 pewarnaan bagiandari sampel lipoma identik ditunjukkan pada Gambar. 1. (a-f) TUNEL, (a ¢ ¢-f)anti-DNase I dan (a ¢ ¢ ¢ ¢-f) Hoechst 33342 pewarnaan.

degradasi kromatin selama kematian sel nekrotik adalah DNase I.12 DNase I merupakan enzim ekstraseluler hadir dalam plasma darah namun mampu berdifusi ke dalam inti cells.7 nekrotik, 12 Anti-Dnase I pewarnaan sampel kontrol menunjukkan tidak adanya nuklir pewarnaan (Gambar 3AA ¢), sedangkan setelah pengobatan Lipostabil sebuah peningkatanjumlah inti adipocyte menjadi DNase I-positif, menunjukkan bahwa penghapusan adipocyte terjadi terutama oleh sel nekrotik kematian (Gambar 3b ¢ â € "EA ¢). DNase I-positif inti adipocyte adalah terdeteksi sudah 4 jam setelah perlakuan (panah pada Gambar. 3b ¢), bersama dengan jumlah positif sel darah endotel dan putih, yang sel endotel dan sel darah putih mungkin menjadi sumber dari endonuklease ekspresi. Sepuluh jam setelah perawatan, jumlah dari DNase I-positif inti tertinggi dan muncul untuk mengurangi sampai 48 jam (Gambar 3c ¢ â € "fa ¢).Pemeriksaan ketergantungan waktu dari TUNEL dan anti- DNase pewarnaan I sebutkan bahwa jumlah inti per luas menurun 10-48 jam. Pengamatan ini didukung oleh kromatin pewarnaan menggunakan Hoechst 33342 (Gambar 3a ¢ ¢ ¢ ¢-f). Pada 24 sampai 48 jam, sebagian besar inti adipocyte muncul terkondensasi (pyknotic), khas kematian sel nekrotik (panah pada Gambar. ¢ ¢ ¢ 3c-e ¢). hanya sangat jarang sekali kita mengamati inti yang menunjukkan fitur struktural apoptosis (lihat ¢ ¢ inset pada Gambar. 3e)

Mikroskopi Elektron

TUNEL bersama-sama dengan anti-DNase pewarnaan saya menunjukkan induksi kematian sel nekrotik adipocyte setelah pengobatan lipolitik melalui suntikan Lipostabil, seperti juga yang disarankan oleh peningkatan terjadinya inti sel pyknotic diungkapkan oleh Hoechst 33342 pewarnaan (lihat Gbr. 3). Selain itu, kami melakukan sebuah elektron-mikroskopisanalisis untuk menentukan secara akurat modus kematian sel. Mikroskop elektron umumnya dianggap sebagai 'standar emas' untuk membedakan antara apoptosis dan nekrosis. Dalam sampel biopsi yang paling jaringan lemak sangat dipengaruhi, tanda-tanda nekrosis sel lemak yang terlihat, sebagaimana dicontohkan pada Gambar. 4b. Keempat sampel cukup jaringan lemak yang terkena juga menunjukkan nekrosis sel lemak, tetapi untuk jauh lebih rendah derajat (tidak ditampilkan). Namun, sangat jarang, kita juga terdeteksi adipocyte inti yang menunjukkan tanda-tanda apoptosis (Gambar 4c). Pada kelompok kontrol, tidak ada nekrosis sel lemak atau apoptosis adalah diamati, dan inti yang disajikan penampilan reguler (Gambar 4a).

Diskusi

Penggunaan PC-dan DC yang mengandung zat (misalnya Lipostabil) untuk aplikasi intralesi dalam lemak subkutan adalah populer dan banyak digunakan teknik untuk melarutkan lemak lokal accumulations.1, 13 Berbagai indikasi telah dijelaskan dalam literatur, mulai dari bantalan kelopak mata menurunkan lemak, lipoma lokal, dan 'Buffalo punuk 'lipodistrofi penumpukan lemak pada pinggang dan hip.1,13-17 Meskipun penggunaan yang luas, mekanisme lipolisis

oleh Lipostabil injeksi tidak sepenuhnya dipahami sampai sekarang. diBahkan, untuk waktu yang lama tidak ada konsensus yang telah dicapai tentang apakah PC atau DC adalah bahan aktif utama atau apakah sinergis akibat antara kedua zat ada, sampai laporan menunjukkan bahwa itu adalah DC yang menimbulkan reaksi tidak spesifik deterjen menyebabkansel destruction.2, 4,16 Lebih lanjut mengamati bahwa DC tidak hanya diinduksi penghancuran sel lemak tetapi juga jenis sel lain seperti endotel vaskular dan sel otot. Namun demikian, masih belum memiliki tegas menunjukkan apakah Lipostabil? suntikan juga menyebabkan nekrosis atau apoptosis adipocytes in vivo. Data yang tersedia menunjukkaninduksi nekrosis hanya berdasarkan pewarnaan HE di lemak hewan atau pada jaringan tersebut dalam data in vitro dalam sel adipocyte budaya model.3, 18 Penelitian ini adalah yang pertama untuk mengevaluasi reaksi seluler (apoptosis vs nekrosis) dari adiposit manusia dalam vivo untuk Lipostabil pada tahap awal pengobatan. Kami menunjukkan bahwa Lipostabil injeksi menginduksi kematian sel adipocyte dalam waktu 48 jam. Yang dikumpulkan imunohistokimia, elektron-mikroskopis dan biokimia Data jelas menunjukkan bahwa PC / DC (Lipostabil) injeksi mengarah dominan nekrosis sel-sel lemak. Pewarnaan TUNEL menunjukkan induksi sel adipocyte kematian mulai dari 4 jam dan memuncak antara 24 dan 48 jam setelah Lipostabil injeksi. Negatif pewarnaan untuk aktif caspase-3 dan positifpewarnaan untuk DNase saya menunjukkan kematian sel nekrotik. DNaseSaya dan anggota erat terkait keluarga yang hadir di semua ekstraseluler cairan tubuh dan menyebar ke dalam inti sel nekrotik dalam budaya dan dalam jaringan, di mana mereka mengkatalisis degradasi kromatin, menyebabkan TUNEL positivity.7, 12,19 Memang, sejumlah studi telah menunjukkan bahwa pewarnaan TUNEL positif tidak dapat dianggap sebagai sebuah ciri eksklusif sel, apoptosis death.12 20 Sebaliknya, tambahan parameter harus dipertimbangkan untuk menentukan secara definitif modus kematian sel. Oleh karena itu, kami dilengkapi penyelidikan kami dengan menunjukkan, dalam uji biokimia, kurangnya caspase-3 dan aktivasi, dalam studi morfologi menggunakan elektron mikroskop 48 jam setelah Lipostabil? injeksi, dominasi kematian sel nekrotik adipocyte. Data kami juga mungkin menyarankan saja lebih dibedakan dari aktivitas untuk jenis sel tertentu setelah Lipostabil? injeksi, karena setelah 4 jam kadang-kadang kami mencatat caspase-3-positif sel-sel, khususnya endotel sel, menunjukkan bahwa jenis sel awalnya mungkin merespon dengan apoptosis yang selanjutnya mungkin menyebabkan sekunder nekrosis. Namun, karena kami mengamati hanya aktif beberapa caspase- 3-positif adipocytes di semua titik waktu diperiksa, kami merasa yakin bahwa modus utama dari eliminasi mereka adalah dengan langsung induksi nekrosis. Selain itu, pengamatan ini menggarisbawahi efek destruktif umum dari campuran DC / PC. Hasil penelitian kami selanjutnya dapat diambil sebagai catatan penting terhadap Lipostabil injeksi dalam kondisi yang menghalangi induksi reaksi peradangan diperpanjang atau mengingat fakta bahwa, karena induksi nekrosis, isi nuklir, yaitu kromatin, mungkin dibebaskan dan diakui sebagai asing oleh kekebalan system.21,22

(a)

Gambar 4-Elektron mikroskopis gambar sampel khas inti sel adipocyte dari lipoma sebelum (a) dan 48 jam setelah Lipostabil injeksi (b, c). (b) menunjukkan inti sel nekrotik khas seperti yang sering diamati setelah injeksi Lipostabil. (c) Menunjukkan inti dengan karakteristik apoptosis, yang terdeteksi jarang. Untuk rincian, lihat teks. Pembesaran untuk semua gambar: 10 000 kali lipat.

Seperti diketahui bahwa lipoma mungkin berbeda dari jaringan lemak yang normal, data kami tidak dapat diterapkan untuk lemak subkutan teratur, jaringan paling sering diobati dengan suntikan lipolysis.23 Penelitian ini meneliti lipoma biopsi yang diambil selama jangka waktu diperpanjang setelah injeksi Lipostabil, selain jumlah yang lebih besar sampel yang dikumpulkan 48 jam setelah perawatan. Oleh karena itu, kami mampu menyelidiki kejadian dan modus kematian sel adipocyte lebih jangka waktu yang panjang dan menganalisis sejumlah besar sampel setelah 48 jam. Namun demikian, akan menarik untuk mengevaluasi jaringan lemak yang normal setelah injeksi Lipostabil dan menentukan apakah induksi dan â "atau luas nekrosis sel lemak adalah tergantung dosis, seperti ditampilkan untuk sistem kultur sel, atau apakah suntikan yang lebih rendah jumlah campuran "PC DCA dapat menyebabkan apoptosis adipocyte in vivo, mengingat bahwa induksi alternatif nekrosis atau apoptosis telah berulang kali terbukti dosis dependent.3 Akhirnya penulis ingin menekankan bahwa harus hati-hati disarankan untuk penggunaan off-label zat PC dan DC yang mengandung untuk lemak estetika melarutkan, sebagai risiko yang pasti tidak dapat diperkirakan saat ini.

RANGKUMAN

Injeksi lipolisis, juga disebut lipo-larut atau lemak larut, menjelaskan prosedur dalam kedokteran estetika yang bertujuan untuk pengurangan lokal lemak akumulasi dengan suntikan intralesi zat yang menginduksi kerusakan sel lemak. zat-fosfatidilkolin dan deoxycholate mengandung digunakan untuk mengobati lokal lemak akumulasi dan lipoma. Tujuan menyelidiki apakah nekrosis atau apoptosis sel-sel lemak diinduksi oleh zat disuntikkan. Metode Sampel dari jaringan lemak dari lipoma dikumpulkan pada berbagai waktu setelah injeksi dan dievaluasi oleh cahaya dan mikroskop elektron, dengan immunostaining untuk aktif caspase-3 dan antideoxyribonuclease I, di situ akhir pelabelan

(TUNEL pewarnaan), dan caspase-3 biokimia tes. Hasil Light dan mikroskop elektron menunjukkan nekrosis sel lemak di seluruh wilayah di lipoma diobati. Kesimpulan Injeksi dari fosfatidilkolin zat lipolitik dan deoxycholate menyebabkan nekrosis sel lemak bukan apoptosis. Namun, penelitian tambahan mengevaluasi dosis yang berbeda dan titik waktu yang lebih lanjut setelah pengobatan diperlukan. lipoma mungkin berbeda dari jaringan lemak yang normal, data tidak dapat diterapkan untuk lemak subkutan teratur, jaringan paling sering diobati dengan suntikan lipolysis.Penelitian ini meneliti lipoma biopsi yang diambil selama jangka waktu diperpanjang setelah injeksi Lipostabil, selain jumlah yang lebih besar sampel yang dikumpulkan 48 jam setelah perawatan. Oleh karena itu, mampu menyelidiki kejadian dan modus kematian sel adipocyte lebih jangka waktu yang panjang dan menganalisis sejumlah besar sampel setelah 48 jam. Namun demikian, akan menarik untuk mengevaluasi jaringan lemak yang normal setelah injeksi Lipostabil dan menentukan apakah induksi dan atau luas nekrosis sel lemak adalah tergantung dosis, seperti ditampilkan untuk sistem kultur sel, atau apakah suntikan yang lebih rendah jumlah campuran "PC DCA dapat menyebabkan apoptosis adipocyte in vivo, mengingat bahwa induksi alternatif nekrosis atau apoptosis telah berulang kali terbukti dosis dependent. Akhirnya menekankan bahwa harus hati-hati disarankan untuk penggunaan off-label zat PC dan DC yang mengandung untuk lemak estetika , sebagai risiko yang pasti tidak dapat diperkirakan saat ini.