UJI AKTIVITAS ADAPTOGENIK EKSTRAK ETANOL DAUN … · kemudian dilanjutkan dengan analisis LSD. Hasil menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun Z. mauritiana dengan dosis 200 mg/kg BB,

i

UJI AKTIVITAS ADAPTOGENIK EKSTRAK

ETANOL DAUN BIDARA (Ziziphus mauritiana Auct.

non Lamk.) DENGAN METODE SWIMMING

ENDURANCE TEST PADA MENCIT GALUR BALB/C

Skripsi

I DEWA MADE RONI TARADIPTA

1108505010

JURUSAN FARMASI

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

UNIVERSITAS UDAYANA

2015

ii

iii

KATA PENGANTAR

Puji syukur penulis panjatkan kehadapan Tuhan Yang Maha Esa, karena

atas berkat rahmat-Nya penulis dapat menyelesaikan skripsi yang berjudul “Uji

Aktivitas Adaptogenik Ekstrak Etanol Daun Bidara (Ziziphus Mauritiana

Auct. non Lamk.) dengan Metode Swimming Endurance Test pada Mencit

Galur Balb/C” tepat pada waktunya.

Penyusunan skripsi ini tidak terlepas dari dukungan, saran dan bimbingan dari

berbagai pihak. Maka dari itu, pada kesempatan ini penulis ingin mengucapkan

terima kasih kepada:

1. Putu Oka Samirana, S.Farm., M.Sc., Apt., selaku dosen pembimbing I

yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,

bimbingan dan saran dengan sabar selama penulis mengikuti pendidikan

di Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.

2. Ni Putu Eka Leliqia, S.Farm., M.Si., Apt., selaku dosen pembimbing II

yang dengan penuh perhatian telah memberikan motivasi, semangat,

bimbingan dan saran selama penulis mengikuti pendidikan di Jurusan

Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas

Udayana, khususnya dalam penyusunan skripsi ini.

3. Ir. Anak Agung Gde Raka Dalem, M.Sc. (Hons), selaku Dekan Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam Universitas Udayana.

4. Dr. rer. nat. I Made Agus Gelgel Wirasuta, M.Si., Apt., selaku Ketua

Jurusan Farmasi Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam

Universitas Udayana.

5. Seluruh dosen dan staf pegawai di Jurusan Farmasi Fakultas MIPA

Universitas Udayana yang telah memberikan bantuan kepada penulis

selama penyusunan skripsi ini.

6. Orang tua yang sangat saya cintai dan hormati, Dewa Ketut Suciptana

dan Ni Nengah Tariani yang telah mengasuh dan membesarkan penulis,

membimbing dan memberi motivasi dalam penyusunan skripsi ini.

iv

7. Kakak kandung saya yaitu Desak Gede Desi Antari dan keluarga besar di

Desa Samsam, Kecamatan Kerambitan, Kabupaten Tabanan yang selalu

memberi motivasi dan dukungan.

8. Para laboran yaitu Kak Anggi, Kak Pasek dan Mbok Dwi yang banyak

membantu dalam penyusunan skripsi ini.

9. Seluruh rekan mahasiswa Jurusan Farmasi angkatan 2011, khususnya tim

seperjuangan penulis yaitu Ari Setyadi, Redika, Andre, Evi Savitri,

Samiantara dan rekan-rekan Bahan Alam 2011 lainnya yang banyak

membantu dan memberikan semangat dalam penyusunan skripsi ini.

10. Semua pihak yang terlibat dan telah membantu penulis dalam

penyusunan skripsi ini yang tidak dapat penulis sebutkan satu per satu.

Penulis menyadari bahwa penyusunan skripsi ini masih belum sempurna.

Untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran dari semua pihak yang bersifat

membangun sehingga di masa yang akan datang dapat menjadi lebih baik. Penulis

berharap semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi semua pihak yang

memerlukan.

Bukit Jimbaran, Agustus 2015

Penulis

v

DAFTAR ISI

Halaman

HALAMAN JUDUL ........................................................................................ i

LEMBAR PENGESAHAN ............................................................................. ii

KATA PENGANTAR ..................................................................................... iii

DAFTAR ISI .................................................................................................... v

DAFTAR TABEL ............................................................................................ viii

DAFTAR GAMBAR ....................................................................................... ix

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................... xi

DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH ....................................................... xii

ABSTRAK ....................................................................................................... xiii

ABSTRACT ..................................................................................................... xiv

BAB I. PENDAHULUAN ........................................................................... 1

1.1. Latar Belakang.......................................................................... 1

1.2. Rumusan Masalah .................................................................... 4

1.3. Tujuan ....................................................................................... 5

1.4. Manfaat ..................................................................................... 5

BAB II. TINJAUAN PUSTAKA .................................................................. 6

2.1. Bidara (Ziziphus mauritiana Lam.) .......................................... 6

2.1.1. Morfologi ...................................................................... 6

2.1.2. Distribusi ...................................................................... 7

2.1.3. Khasiat .......................................................................... 7

2.1.4. Kandungan kimia .......................................................... 8

2.2. Radikal Bebas dan Stres Oksidatif ........................................... 8

2.3. Antioksidan ............................................................................... 9

2.4. Adaptogen ................................................................................. 10

2.5. Metode Uji Adaptogenik pada Hewan ..................................... 11

2.6. Ekstrak ...................................................................................... 12

2.7. Ekstraksi ................................................................................... 12

2.8. Penentuan Aktivitas Penangkapan Radikal DPPH ................... 13

vi

2.9. Kromatografi Lapis Tipis (KLT) .............................................. 14

BAB III. METODE PENELITIAN ................................................................ 17

3.1. Rancangan Penelitian ............................................................... 17

3.2. Lokasi dan Waktu Penelitian .................................................... 18

3.3. Hewan Uji ................................................................................. 19

3.4. Bahan dan Alat Penelitian ........................................................ 19

3.4.1. Bahan tanaman.............................................................. 19

3.4.2. Bahan kimia untuk ekstraksi ......................................... 19

3.4.3. Bahan kimia untuk uji aktivitas adaptogenik................ 20

3.4.4. Bahan untuk uji fitokimia ............................................. 20

3.4.5. Bahan untuk uji konfirmasi aktivitas antioksidan ........ 20

3.4.6. Alat penelitian ............................................................... 20

3.5. Prosedur Penelitian ................................................................... 21

3.5.1. Pengumpulan, pengeringan dan penyerbukan

sampel ........................................................................... 21

3.5.2. Penetapan susut pengeringan serbuk daun

Z. mauritiana Lam. ....................................................... 21

3.5.3. Pembuatan ekstrak etanol daun Z. mauritiana

Lam. .............................................................................. 21

3.5.4. Uji fitokimia.................................................................. 22

3.5.5. Uji konfirmasi aktivitas antioksidan ............................. 25

3.5.6. Uji aktivitas adaptogenik secara in vivo pada mencit

(Swimming Endurance Test) ......................................... 28

3.6. Analisis Data ............................................................................ 29

BAB IV. HASIL DAN PEMBAHASAN ....................................................... 31

4.1. Hasil Penetapan Susut Pengeringan ......................................... 31

4.2. Hasil Pembuatan Ekstrak Etanol Daun Z. mauritiana

Lam. .......................................................................................... 31

4.3. Hasil Uji Fitokimia pada Ekstrak Etanol Daun Z. mauritiana

Lam. .......................................................................................... 32

vii

4.4. Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Z. mauritiana Lam.

dengan KLT-Densitometri........................................................ 34

4.5. Hasil Uji Konfirmasi Aktivitas Antioksidan ............................ 46

4.6. Hasil Uji Aktivitas Adaptogenik secara in vivo pada

Mencit ...................................................................................... 48

BAB V. KESIMPULAN DAN SARAN ....................................................... 54

5.1. Kesimpulan ............................................................................... 54

5.2. Saran ......................................................................................... 54

DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................... 55

LAMPIRAN ..................................................................................................... 60

viii

DAFTAR TABEL

Halaman

Tabel 2.1. Sistem Pelarut yang Digunakan untuk Identifikasi Kandungan

Kimia Tumbuhan........................................................................... 15

Tabel 3.1. Sistem Fase Gerak yang Digunakan untuk KLT-

Densitometri. ................................................................................. 24

Tabel 3.2. Jenis Pereaksi Pendeteksi dan Hasil Positif yang

Dihasilkan...................................................................................... 25

Tabel 3.3. Perlakuan Hewan Uji .................................................................... 28

Tabel 4.1. Hasil Uji Fitokimia pada Ekstrak Etanol Daun Z.

mauritiana. .................................................................................... 33

Tabel 4.2. Data Rf dan warna dari masing-masing bercak pada uji

flavonoid dengan KLT-Densitometri ............................................ 36

Tabel 4.3. Data Rf dan warna dari masing-masing bercak pada uji

saponin dengan KLT-Densitometri ............................................... 39

Tabel 4.4. Data Rf dan warna dari masing-masing bercak pada uji

triterpenoid dengan KLT-Densitometri ......................................... 42

Tabel 4.5. Data Rf dan warna dari masing-masing bercak pada uji

alkaloid dengan KLT-Densitometri .............................................. 45

Tabel 4.6. Ringkasan hasil analisis LSD ........................................................ 50

ix

DAFTAR GAMBAR

Halaman

Gambar 2.1. Tanaman Z. mauritiana (a), daun tanaman Z. mauritiana

(b).. ........................................................................................... 7

Gambar 3.1. Skema rancangan pengujian aktivitas adaptogenik .................. 18

Gambar 3.2. Skema kerja umum penelitian .................................................. 30

Gambar 4.1. Profil KLT uji flavonoid ekstrak etanol daun Z. mauritiana

dengan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak butanol:

asam asetat: air (4:1:5 v/v) di bawah sinar UV 254 nm (A),

366 nm (B), setelah direaksikan dengan uap amonia (C) dan

vanilin 1%-asam sulfat (D) serta uji aktivitas antioksidan

secara kualitatif dengan DPPH (E) ........................................... 35

Gambar 4.2. Pola kromatogram uji flavonoid ekstrak etanol daun Z.

mauritiana dengan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak

butanol: asam asetat: air (4:1:5 v/v) pada panjang gelombang

254 nm (A) dan 366 nm (B) ..................................................... 37

Gambar 4.3. Profil KLT uji saponin ekstrak etanol daun Z. mauritiana

dengan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak kloroform:

metanol: air (70:30:4 v/v) di bawah sinar UV 254 nm (A),

366 nm (B) dan setelah disemprot dengan vanilin 1%-asam

sulfat (C) serta uji aktivitas antioksidan secara kualitatif

dengan DPPH (D) ..................................................................... 38

Gambar 4.4. Pola kromatogram uji saponin ekstrak etanol daun Z.

mauritiana dengan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak

kloroform: metanol: air (70:30:4 v/v) pada panjang

gelombang 254 nm (A) dan 366 nm (B) .................................. 40

x

Gambar 4.5. Profil KLT uji triterpenoid ekstrak etanol daun Z. mauritiana

dengan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak kloroform:

metanol (20:1 v/v) di bawah sinar UV 254 nm (A), 366 nm

(B) dan setelah disemprot dengan vanilin 1%-asam sulfat (C)

serta uji aktivitas antioksidan secara kualitatif dengan DPPH

(D)............................................................................................. 41

Gambar 4.6. Pola kromatogram uji triterpenoid ekstrak etanol daun Z.

mauritiana dengan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak

kloroform: metanol (20:1 v/v) pada panjang gelombang 254

nm (A) dan 366 nm (B) ............................................................ 43

Gambar 4.7. Profil KLT uji alkaloid ekstrak etanol daun Z. mauritiana

dengan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak toluen: etil

asetat: amonia (80:10:10 v/v) di bawah sinar UV 254 nm (A),

366 nm (B) dan setelah disemprot dengan dragendorff (C)

serta uji aktivitas antioksidan secara kualitatif dengan DPPH

(D)............................................................................................. 44

Gambar 4.8. Pola kromatogram uji alkaloid ekstrak etanol daun Z.

mauritiana dengan fase diam silika gel GF254 dan fase gerak

toluen: etil asetat: amonia (80:10:10 v/v) pada panjang

gelombang 254 nm (A) dan 366 nm (B) .................................. 46

Gambar 4.9. Diagram batang perbandingan nilai IC50 ekstrak etanol daun

Z. mauritiana dengan vitamin C. .............................................. 47

Gambar 4.10. Diagram batang rata-rata waktu berenang mencit pada uji

adaptogenik............................................................................... 49

xi

DAFTAR LAMPIRAN

Halaman

Lampiran 1. Surat Keterangan Determinasi Tumbuhan .................................. 60

Lampiran 2. Surat Keterangan Ethical Clearence ........................................... 61

Lampiran 3. Hasil Penetapan Susut Pengeringan ............................................ 62

Lampiran 4. Hasil Uji Fitokimia Ekstrak Etanol Daun Z. mauritiana ............ 63

Lampiran 5. Hasil Uji Konfirmasi Aktivitas Antioksidan .............................. 68

Lampiran 6. Hasil Uji Aktivitas Adaptogenik dengan Metode Swimming

Endurance Test (SET) ................................................................ 71

Lampiran 7. Analisis Statistik ......................................................................... 74

xii

DAFTAR SINGKATAN DAN ISTILAH

ATP : Adenosine triphosphate

BHT : Butylated hydroxytoluene

CMC-Na : Carboxy Methyl Cellulose - Natrium

DPPH : 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl

DNA : Deoxyribonucleic Acid

Hsp : Heat shock protein

IC50 : Inhibitor Concentration 50

Imunomodulator : Agen yang mempengaruhi (melemahkan atau menguatkan)

respon imunitas

In vivo : Bahasa latin untuk ―dalam organisme hidup‖. Umumnya

mengacu pada penelitian yang dilakukan menggunakan

subjek manusia atau hewan.

In vitro : Bahasa latin untuk ―di dalam kaca‖, mengacu pada penelitian

yang dilakukan dalam tabung uji atau di luar tubuh manusia.

JNK : c-Jun N-terminal protein kinase

NO : Nitric Oxide

ROS : Reactive Oxygen Species

SET : Swimming Endurance Test

Stressor : Rangsangan atau peristiwa yang mengganggu keseimbangan

organisme

Tonik : Obat herbal yang memiliki efek meningkatkan stamina

xiii

ABSTRAK

Ziziphus mauritiana atau bidara telah terbukti memiliki aktivitas antioksidan

berdasarkan atas penelitian-penelitian sebelumnya. Suatu teori yang menyatakan

bahwa aktivitas antioksidan berkontribusi terhadap aktivitas adaptogenik serta

efek empiris sebagai tonik memperkuat dugaan bahwa tumbuhan ini memiliki

potensi sebagai adaptogenik. Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengetahui

aktivitas adaptogenik dari ekstrak etanol daun Z. mauritiana dan hubungannya

dengan aktivitas antioksidan.

Adapun tahapan dari penelitian ini yaitu ekstraksi menggunakan metode

maserasi, uji fitokimia, uji penangkapan radikal DPPH dan uji aktivitas

adaptogenik dengan uji Swimming Endurance Test (SET). Uji aktivitas

adaptogenik dilakukan terhadap mencit galur Balb/C yang dibagi menjadi 6

kelompok yaitu kelompok kontrol normal, kontrol negatif, kontrol positif dan

perlakuan (diberikan ekstrak dengan dosis 200, 400 dan 800 mg/kg BB). Analisis

data dilakukan dengan uji ANOVA one way dengan taraf kepercayaan 95%,

kemudian dilanjutkan dengan analisis LSD.

Hasil menunjukkan bahwa ekstrak etanol daun Z. mauritiana dengan dosis

200 mg/kg BB, 400 mg/kg BB dan 800 mg/kg BB memiliki aktivitas adaptogenik

(p<0,05). Hasil uji aktivitas antioksidan secara kualitatif menunjukkan beberapa

kandungan kimia dalam ekstrak etanol daun Z. mauritiana seperti flavonoid,

saponin dan triterpenoid memiliki aktivitas antioksidan. Hasil penelitian

menunjukkan aktivitas antioksidan melalui mekanisme penangkapan radikal bebas

mampu berkontribusi terhadap aktivitas adaptogenik namun aktivitas adaptogenik

dari ekstrak etanol daun Z. mauritiana tidak hanya melalui mekanisme tersebut

melainkan diduga terdapat mekanisme lain yang mendukung aktivitas

adaptogenik.

Kata kunci : Ziziphus mauritiana, Daun, Swimming Endurance Test,

Antioksidan, Adaptogenik

xiv

ABSTRACT

Ziziphus mauritiana or bidara has been shown have antioxidant activity

based on previous studies. A theory states that the antioxidant activity contributes

to the adaptogenic activity as well as its empirical effect as tonic strengthen the

assumption that this plant has the potential as adaptogenic. The purpose of this

study is to determine the adaptogenic activity of Z. mauritiana leaves ethanol

extract and its relationship with antioxidant activity.

The steps of this study include extraction using maceration method,

phytochemical test, DPPH radical scavenging test and adaptogenic test using

Swimming Endurance Test (SET). Adaptogenic activity test was carried out on

Balb/C strain mice were divided into 6 groups include normal control, negative,

positive and treatment group (given extract at a dose of 200, 400 and 800 mg/kg

BW). Data analysis was performed by one way ANOVA test with confidence

level of 95%, then proceed with the analysis of LSD.

Result showed that the ethanol extract of Z. mauritiana leaves with a dose

of 200, 400 and 800 mg/kg BW has adaptogenic activity (p<0.05). Antioxidant

activity assay results qualitatively showed some chemical constituents in leaves of

Z. mauritiana ethanol extract such as flavonoid, saponin and triterpenoid has

antioxidant activity. The result of this study showed antioxidant activity can

contribute to the adaptogenic activity, but the adaptogenic activity of Z.

mauritiana leaves ethanol extract is not only caused by antioxidant activity but

maybe also by other mechanisms that support the activities of adaptogenic.

Keyword : Ziziphus mauritiana, Leaves, Swimming Endurance Test,

Antioxidant, Adaptogenic