Profil Kimia Fraksi Aktif Antioksidan Dari Ekstrak Metanol Daun Pohon Penghasil Gaharu Aquilaria Microcarpa Hasil Inokulasi

8/17/2019 Profil Kimia Fraksi Aktif Antioksidan Dari Ekstrak Metanol Daun Pohon Penghasil Gaharu Aquilaria Microcarpa Hasil …

1/41

PROFIL KIMIA FRAKSI AKTIF ANTIOKSIDAN DARIEKSTRAK METANOL DAUN POHON PENGHASIL GAHARU

Aqui lari a microcarpa HASIL INOKULASI

MAKKY JANUARI MUKTI

DEPARTEMEN KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR

2016


2/41


3/41

PERNYATAAN MENGENAI SKRIPSI DAN

SUMBER INFORMASI SERTA PELIMPAHAN HAK CIPTA

Dengan ini saya menyatakan bahwa skripsi berjudul Profil Kimia Fraksi

Aktif Antioksidan dari Ekstrak Metanol Daun Pohon Penghasil Gaharu Aquilariamicrocarpa Hasil Inokulasi adalah benar karya saya dengan arahan dari komisi

pembimbing dan belum diajukan dalam bentuk apa pun kepada perguruan tinggi

mana pun. Sumber informasi yang berasal atau dikutip dari karya yang diterbitkan

maupun tidak diterbitkan dari penulis lain telah disebutkan dalam teks dan

dicantumkan dalam Daftar Pustaka di bagian akhir skripsi ini.

Dengan ini saya melimpahkan hak cipta dari karya tulis saya kepada Institut

Pertanian Bogor.

Bogor, Januari 2016

Makky Januari Mukti

NIM G44124017


4/41


5/41

ABSTRAK

MAKKY JANUARI MUKTI. Profil Kimia Fraksi Aktif Antioksidan dari Ekstrak

Metanol Daun Pohon Penghasil Gaharu Aquilaria microcarpa Hasil Inokulasi.

Dibimbing oleh DUDI TOHIR dan ERDY SANTOSO.

Aquilaria microcarpa merupakan salah satu pohon penghasil gaharu yang

digunakan secara luas dalam produksi minyak atsiri. Tujuan penelitian ini adalah

untuk mengidentifikasi komponen kimia fraksi aktif antioksidan dari ekstrak

metanol daun pohon A. microcarpa hasil inokulasi. Percobaan dilakukan dengan

mengekstraksi daun menggunakan pelarut metanol, lalu ekstrak kasar tersebut

difraksionasi dengan teknik kromatografi kolom gradien menggunakan 4 pelarut

yang berbeda polaritasnya. Fraksionasi dengan kolom silika gel menghasilkan 4

fraksi, yaitu fraksi diklorometana, diklorometana-metanol 1:1, metanol, dan

metanol-air 1:1. Uji aktivitas antioksidan setiap fraksi menunjukkan bahwa fraksi

metanol memiliki aktivitas tertinggi dalam penghambatan radikal 2,2-difenil-1- pikrilhidrazil (DPPH) dengan nilai IC50 25.89 μg/mL. Kromatogram gas-spektrum

massa fraksi tersebut menunjukkan keberadaan senyawa fenolik, yaitu 5-

nitropirimidina-2,4-diol (0.22%) dan amina sekunder aromatik, yaitu asam N -(3,5-

dinitro-2-piridinil)aspartat (0.10%) yang diduga berperan sebagai senyawa

antioksidan. Kapasitas antioksidan yang baik ini menunjukkan potensi daun A.

microcarpa sebagai sumber obat yang berguna.

Kata kunci: amina sekunder aromatik, antioksidan, daun, fenolik, gaharu

ABSTRACT

MAKKY JANUARI MUKTI. Chemical Profile of Antioxidant Active Fraction of

Methanol Extract of Inoculated Agarwood-Producing Tree Aquilaria microcarpa

Leaves. Supervised by DUDI TOHIR and ERDY SANTOSO.

Aquilaria microcarpa is one of the agarwood-producing trees widely used

for highly valuable essential oil production. This study aimed to identify chemical

components in antioxidant active fraction of methanol extract of inoculated A.

microcarpa tree leaves. The experiment was performed by extracting the leaves

with methanol solvent, and then the extract was fractionated using gradient

column chromatography method utilizing 4 solvents with different polarities. This

fractionation using silica gel column gave 4 fractions, namely dichloromethane,

dichloromethane-methanol 1:1, methanol, and methanol-water 1:1 fractions.Determination on antioxidant activity of each fraction showed that methanol

fraction has the highest inhibition of 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)

radical scavenging activity with IC50 of 25.89 μg/mL. Gas chromatogram-mass

spectrum of the fraction showed a phenolic compound as 5-nitropyrimidine-2,4-

diol (0.22%) and a secondary aromatic amine as N -(3,5-dinitro-2-

pyridinyl)aspartic acid (0.10%), which presumably act as antioxidant agents. The

antioxidant property indicates the potential of A. microcarpa leaves as a source of

useful drugs.

Keywords: agarwood, antioxidant, leaves, phenolic compound, secondary

aromatic amine


6/41


7/41

Skripsi

sebagai salah satu syarat untuk memperoleh gelar

Sarjana Sains

pada

Departemen Kimia

PROFIL KIMIA FRAKSI AKTIF ANTIOKSIDAN DARIEKSTRAK METANOL DAUN POHON PENGHASIL GAHARU

Aqui lari a microcarpa HASIL INOKULASI

MAKKY JANUARI MUKTI

DEPARTEMEN KIMIA

FAKULTAS MATEMATIKA DAN ILMU PENGETAHUAN ALAM

INSTITUT PERTANIAN BOGOR

BOGOR

2016


8/41


9/41


10/41


11/41

PRAKATA

Puji dan syukur penulis panjatkan kepada Allah subhanahu wa t a’ala atas

segala karunia-Nya sehingga karya ilmiah yang berjudul Profil Kimia Fraksi AktifAntioksidan dari Ekstrak Metanol Daun Pohon Penghasil Gaharu Aquilaria

microcarpa Hasil Inokulasi ini berhasil diselesaikan.

Terima kasih penulis ucapkan kepada Bapak Drs Dudi Tohir, MS dan

Bapak Dr Erdy Santoso, MS selaku pembimbing yang telah banyak memberi

bimbingan, arahan, dan saran. Di samping itu, penghargaan penulis sampaikan

kepada Bapak Atep dari KHDTK Carita yang telah membantu dalam pengambilan

sampel dan Bapak Sabur dari Laboratorium Kimia Organik Departemen Kimia

IPB yang telah membantu dalam persiapan alat dan bahan penelitian. Ungkapan

terima kasih juga disampaikan kepada Ibu dan seluruh keluarga atas segala doa,

dukungan dan kasih sayangnya.

Semoga karya ilmiah ini bermanfaat.

Bogor, Januari 2016

Makky Januari Mukti


12/41


13/41

DAFTAR ISI

DAFTAR TABEL vii

DAFTAR GAMBAR viiDAFTAR LAMPIRAN vii

PENDAHULUAN 1

METODE 2

Alat dan Bahan 2

Pengambilan Sampel 2

Preparasi Sampel 2

Penentuan Kadar Air 3

Ekstraksi 3

Fraksionasi 3

Uji Aktivitas Antioksidan 4

Analisis GC-MS 4HASIL DAN PEMBAHASAN 4

Kadar Air 4

Ekstraksi 5

Fraksionasi 6

Aktivitas Antioksidan 6

Analisis GC-MS 8

SIMPULAN DAN SARAN 10

Simpulan 10

Saran 10

DAFTAR PUSTAKA 11

LAMPIRAN 13RIWAYAT HIDUP 27


14/41

DAFTAR TABEL

1 Aktivitas antioksidan ekstrak kasar dan hasil fraksionasi 7

2 Profil kimia fraksi metanol ekstrak daun muda A. microcarpa hasil

inokulasi 9

DAFTAR GAMBAR

1

Diagram rendemen fraksi-fraksi ekstrak metanol daun A. microcarpa

hasil inokulasi, menggunakan kolom silika gel dengan varian eluen 6

2

Reaksi DPPH dengan antioksidan 7

3 Dugaan senyawa aktif antioksidan dalam fraksi metanol ekstrak daun

muda A. microcarpa hasil inokulasi: 1) alkaloid fenolik (5-

nitropirimidina-2,4-diol) dan 2) alkaloid amina sekunder aromatik

(asam N -(3,5-dinitro-2-piridinil)aspartat) 10

DAFTAR LAMPIRAN

1 Diagram alir penelitian 13

2

Kadar air simplisia daun muda A. microcarpa hasil inokulasi 14

3 Rendemen ekstrak dan fraksi 15

4

Hasil uji antioksidan metode peredaman radikal bebas DPPH 16

5 Spesifikasi dan kondisi alat GC-MS 22

6

Kromatogram GC-MS fraksi metanol 23 7 Struktur senyawa-senyawa hasil analisis GC-MS 24

http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc330897740http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc330897740http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc330897741http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc330897741http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc330897741http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc330897741http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc330897741http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc330897741http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc330897741http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc330897741http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485136http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485136http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485136http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485136http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485136http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485136http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485136http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485137http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485137http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485138http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485137http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485136http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc331485136http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc330897741http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc330897741http://e/PPKI/CD%20PPKI/CD/Templat/Skripsi-Custom.dotx%23_Toc330897740


15/41

1

PENDAHULUAN

Gaharu adalah komoditas hasil hutan bukan kayu yang bernilai ekonomi

tinggi karena sangat luas aplikasinya sebagai bahan wewangian, minyak atsiri,dan pengobatan. Pohon penghasil gaharu terbaik di Indonesia antara lain

Aquilaria malaccensis, Aquilaria microcarpa, dan Gyrinops versteegii. Ketiganya

termasuk ke dalam divisi Spermatophyta, subdivisi Angiospermae, kelas

Magnoliopsida, ordo Myrtales, dan famili Thymelaeaceae (Chang et al . 2008).

Secara umum, perdagangan gaharu digolongkan ke dalam 3 kelas: gubal,

kemedangan, dan abu. Komponen utama minyak gaharu adalah seskuiterpena dan

kromon seperti agarofuran, 2-(2-feniletil)kromon, agarol, agarospirol, dan jinkoh-

eremol (Bhuiyan et al. 2004). Seskuiterpena dan kromon inilah yang

menghasilkan aroma khas gaharu.

Gaharu merupakan endapan resin yang terakumulasi pada jaringan kayu

sebagai reaksi pohon terhadap infeksi jamur. Masuknya mikrob ke dalam jaringantanaman yang terluka dianggap sebagai benda asing sehingga sel tanaman

menghasilkan senyawa fitoaleksin yang merupakan metabolit sekunder sebagai

mekanisme pertahanan tanaman terhadap penyakit akibat infeksi tersebut. Kini

pembentukan gaharu dengan teknologi inokulasi membantu produksi gaharu agar

dapat direncanakan dan dipercepat, yaitu melalui induksi jamur pembentuk gaharu

pada batang pohon penghasil gaharu (Siran 2010).

Di bidang pengobatan tradisional, dilaporkan bahwa gaharu dimanfaatkan

sebagai obat gangguan ginjal, hepatitis, sirosis, rematik, malaria, tukak lambung,

sakit perut dan diare, penghilang stres, penghilang rasa sakit, bahan antibiotik,

stimulan kerja syaraf, antiasma, dan antikanker (Novriyanti 2008). Manfaat

gaharu yang sangat tinggi kemudian menyebabkan perburuan besar-besaran padaspesies pohon penghasil gaharu dan mengakibatkan spesies tersebut menjadi

langka. Aquilaria microcarpa, salah satu pohon penghasil gaharu terbaik yang

banyak tumbuh di Sumatera dan Kalimantan, telah dimasukkan ke dalam

Appendix II Convention on International Trade in Endangered Species of Wild

Fauna and Flora (CITES) sejak tahun 2004 sebagai tumbuhan yang terancam

punah sehingga dalam penebangan dan perdagangannya dibatasi (CITES 2004).

Penelitian telah banyak dilakukan terhadap gaharu dan mengungkap

berbagai macam aktivitas farmakologis yang dimilikinya. Aktivitas farmakologis

tersebut ditentukan terutama oleh kandungan senyawa metabolit sekundernya

(Lisdawati et al . 2006). Sementara itu, seiring proses pembentukan gaharu,

metabolisme pohon penghasil gaharu juga meningkat sehingga metabolit sekunder

yang dihasilkan diduga terdistribusi ke bagian lain dari pohon terutama daun.

Oleh karena itu, studi pada daun pohon penghasil gaharu perlu dikembangkan

sehingga dapat ditentukan potensi farmakologisnya dan di samping itu, juga dapat

meminimumkan kepunahan spesies akibat penebangan pohonnya.

Uji toksisitas ekstrak kasar berbagai macam daun pohon penghasil gaharu,

baik yang diinokulasi maupun yang tidak, telah dilakukan dan dilaporkan bahwa

konsentrasi mematikan 50% (LC50) ekstrak kasar daun muda pohon A.

microcarpa hasil inokulasi isolat jamur asal Papua sebesar 26.47 μg/mL (Dewi

2013). Suatu ekstrak berpotensi sebagai antikanker jika LC50 ˂30 μg/mL sesuai

dengan kriteria yang ditetapkan oleh National Cancer Institute (Ariffin et al .

http://id.wikipedia.org/wiki/Senyawahttp://id.wikipedia.org/wiki/Fitoaleksinhttp://id.wikipedia.org/wiki/Fitoaleksinhttp://id.wikipedia.org/wiki/Senyawa


16/41

2

2009). Data ini mendukung penelitian untuk mengevaluasi aktivitas antioksidan

dari ekstrak daun tersebut. Suatu ekstrak berpotensi sebagai antioksidan jika

konsentrasi penghambatan 50% (IC50) ˂200 μg/mL (Molyneux 2004).

Antioksidan adalah bahan yang beraktivitas mencegah atau menghambat

kerusakan sel akibat reaksi oksidasi oleh radikal bebas (Huda et al . 2009).Aktivitas antioksidan suatu tanaman obat ditentukan oleh kandungan metabolit

sekunder atau senyawa aktif yang dimilikinya sehingga menentukan kualitas

pengobatan. Oleh karena itu, tujuan penelitian ini adalah mengidentifikasi

komponen kimia fraksi aktif antioksidan dari ekstrak metanol daun muda pohon

penghasil gaharu A. microcarpa hasil inokulasi.

METODE

Metode penelitian diringkaskan dalam diagram alir pada Lampiran 1 yangterdiri atas tahap pengambilan sampel, preparasi sampel, maserasi dengan pelarut

metanol, fraksionasi kolom, uji aktivitas antioksidan metode DPPH, dan analisis

kromatografi gas-spektrometri massa (GC-MS).

Alat dan Bahan

Bahan-bahan yang digunakan antara lain daun muda pohon penghasil gaharu

berumur 17 tahun jenis A. microcarpa hasil inokulasi jamur Fusarium solani

(isolat asal Papua) pada tahun 2009, metanol teknis, diklorometana teknis,

akuades, silika gel 60 (0.040-0.063 mm), asam askorbat (vitamin C), dan 2,2-difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH).

Alat yang digunakan antara lain alat kaca, oven, eksikator, penguap putar,

kromatografi kolom, spektrofotometer ultraviolet tampak (UV-Vis) berkas ganda

Pharma Spec 1700 Shimadzu, dan GC-MS Agilent dengan GC seri 7890 dan MS

seri 6950.

Pengambilan Sampel

Pengambilan sampel dilakukan di Kawasan Hutan dengan Tujuan Khusus

(KHDTK) Carita, Banten (6° 28´ LS; 105° 85´ BB) pada bulan Desember 2014.Daun berasal dari pohon A. microcarpa hasil inokulasi isolat jamur asal Papua ( F.

solani). Daun yang diambil adalah daun muda. Daun muda adalah pucuk sampai

beberapa tangkai daun setelahnya yang daunnya masih bertekstur halus, tidak

kaku, dan berwarna hijau muda mengilat.

Preparasi Sampel

Sampel dikeringkan di dalam oven bersuhu 50 °C selama 3 hari hingga

kadar air tidak lebih dari 10%. Setelah itu, sampel digiling hingga menjadi serbuk

yang selanjutnya disebut simplisia.


17/41

3

Penentuan Kadar Air (AOAC 2006)

Simplisia ditimbang sebanyak 1 g kemudian dimasukkan ke dalam cawan

porselen yang telah dipanaskan sebelumnya di dalam oven bersuhu 105 °C selama

3 jam sampai bobotnya konstan. Cawan berisi sampel dipanaskan di dalam oven bersuhu 105 °C selama 3 jam, lalu didinginkan di dalam eksikator dan ditimbang.

Pemanasan diulangi hingga diperoleh bobot konstan. Kadar air contoh ditentukan

dengan persamaan

dr ir ()

100

Keterangan: A = bobot contoh sebelum dikeringkan (g)

B = bobot contoh setelah dikeringkan (g)

Ekstraksi (Dewi 2013)

Simplisia ditimbang sebanyak 280 g, lalu dimasukkan ke dalam labu

erlenmeyer. Metanol ditambahkan dengan nisbah bobot simplisia terhadap volume

metanol sebesar 1:10, dan maserasi dilakukan selama 24 jam dengan bantuan

pengadukan secara berkala. Filtrat disaring dan residu diremaserasi dengan

volume metanol yang sama selama 24 jam sebanyak 2 kali ulangan lagi sehingga

total maserasi menjadi 3×24 jam. Filtrat yang dihasilkan dikumpulkan lalu

dipekatkan dengan penguap putar dan ditentukan rendemennya. Rendemen

ditentukan dengan persamaan

edee estr ()

100

Keterangan: A = bobot ekstrak (g)

B = bobot contoh kering (g)

Fraksionasi (Iswani 2014)

Fraksionasi dilakukan dengan kolom kemas menggunakan silika gel. Sampel

ekstrak pekat sebanyak 12.1166 g dimasukkan ke dalam kolom sepanjang 100 cmdan berdiameter 5 cm dengan bobot silika gel sebanyak 200 g. Pemisahan

golongan senyawa menggunakan elusi gradien dengan 4 jenis eluen yang berbeda

polaritasnya, berturut-turut eluen dengan polaritas yang semakin meningkat, dari

diklorometana, diklorometana-metanol 1:1, metanol, dan metanol-air 1:1. Pelarut

diganti ketika tidak ada lagi pita warna yang turun, ditandai dengan kembalinya

warna eluat menjadi tidak berwarna. Empat fraksi yang diperoleh dipekatkan

dengan penguap putar kemudian dihitung rendemennya. Fraksi-fraksi tersebut

diuji aktivitas antioksidannya dan nilai IC50 yang diperoleh dibandingkan untuk

menentukan fraksi teraktif. Fraksi teraktif yang diperoleh dianalisis komponen

kimianya menggunakan GC-MS.


18/41

4

Uji Aktivitas Antioksidan (Huda et al . 2009)

Sebanyak 7.8864 mg DPPH dilarutkan dalam labu takar 50 mL dengan

metanol sehingga konsentrasinya 0.40 mM. Larutan induk sampel 500 μg/mL

dibuat dari 2.5 mg sampel dilarutkan dengan metanol hingga volumenya 5 mL,dan larutan induk standar asam askorbat 300 μg/mL dibuat dari 3 mg standar

dilarutkan dengan metanol hingga volumenya 10 mL. Deret konsentrasi sampel

dibuat dari larutan induknya menjadi 5, 10, 25, 50, dan 100 μg/mL, demikian pula

deret konsentrasi standar dibuat dari larutan induknya menjadi 3, 6, 9, 12, dan 15

μg/mL. Sampel dan standar masing-masing dimasukkan sebanyak 3 mL ke dalam

tabung reaksi, sebagai blangko digunakan 3 mL metanol. Selanjutnya larutan

DPPH 0.40 mM ditambahkan sebanyak 0.6 mL ke dalam setiap tabung, tepat

sebelum campuran diinkubasi pada suhu 37 °C selama 30 menit. Campuran

diukur absorbansnya dengan spektrofotometer UV-Vis pada λ 515 nm. Nilai IC50

dihitung dari kurva antara persentase aktivitas penghambatan radikal DPPH dan

logaritma konsentrasi sampel dan standar.

Analisis GC-MS (Ichzan 2014)

Fraksi teraktif dari hasil penapisan aktivitas antioksidan pada keempat fraksi,

yaitu fraksi dengan IC50 terendah selanjutnya dianalisis dengan menggunakan GC-

MS Agilent dengan GC seri 7890 dan MS seri 6950 yang kondisi alatnya telah

disesuaikan. Kolom kapiler nonpolar J&W tipe HP-5ms (5%

fenilmetilpolisiloksana) digunakan sebagai fase diam. Helium digunakan sebagai

fase gerak dengan laju alir sebesar 1.00 μL/eit. Pengukuran kromatografi gas

dilakukan pada mode kerja suhu terprogram. Selanjutnya MS dioperasikan padamode ionisasi tumbukan elektron (electron impact ) dengan tegangan 70 eV.Evaluasi spektrum massa dilakukan dengan mencocokkan pola spektrum pada

pustaka spektrum massa pada pangkalan data MS.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Kadar Air

Penentuan kadar air bertujuan memperkirakan ketahanan suatu bahanterhadap aktivitas mikrob. Syarat kadar air untuk simplisia tanaman obat menurut

Herawati et al . (2012) ialah tidak boleh lebih dari 10%. Kadar air di bawah 10%

menunjukkan kestabilan optimum bahan akan tercapai dan pertumbuhan mikrob

dapat dikurangi sehingga dapat memperpanjang masa simpan tanaman kering.

Kadar air simplisia daun A. microcarpa kering diperoleh sebesar 4.44%. Hasil ini

menunjukkan bahwa sampel dapat disimpan dalam waktu yang relatif lama dan

tahan terhadap gangguan mikrob. Kadar air ini juga berguna sebagai faktor

koreksi rendemen ekstrak. Melalui pemanasan pada suhu 105 oC, air yang terikat

secara fisis di dalam suatu bahan akan hilang (Winarno 2012) dan kadar air dapat

dihitung. Perhitungan kadar air disajikan pada Lampiran 2.


19/41

5

Ekstraksi

Ekstraksi adalah proses pemisahan senyawa dari suatu bahan dengan

menggunakan pengekstrak yang sesuai. Pemisahan berprinsip like dissolved like,

artinya kelarutan zat dalam pelarut bergantung pada kepolarannya. Zat yang polarakan larut dalam pelarut polar, sedangkan zat yang nonpolar akan larut dalam

pelarut nonpolar (Harbourne et al . 2013). Ekstraksi maserasi didasarkan pada

perpindahan massa komponen zat padat secara difusi ke dalam pelarut. Sampel

tanaman yang direndam akan mengalami pemecahan dinding sel dan membran sel

akibat perbedaan tekanan antara di dalam dan di luar sel, sehingga metabolit

sekunder dari dalam sitoplasma akan terlarut ke dalam pelarut organik (Seidel

2005).

Maserasi dipilih untuk ekstraksi daun A. microcarpa karena pada teknik ini,

sampel hanya direndam pada suhu ruang tanpa mengalami proses lain selain

pengadukan. Hal ini akan menghindari kerusakan komponen senyawa yang belum

diketahui, sehingga maserasi sangat cocok untuk digunakan dalam ekstraksi pendahuluan senyawa bahan alam. Pemilihan pelarut yang sesuai merupakan

faktor penting dalam proses maserasi. Secara umum, pelarut untuk ekstraksi harus

selektif, mampu mengekstraksi komponen sasaran, sifat racunnya rendah, mudah

diuapkan, dan harganya terjangkau. Alkohol adalah pelarut serbaguna yang baik

untuk ekstraksi pendahuluan karena dapat mengekstraksi keseluruhan senyawa

(Simanjuntak 2007). Metanol juga dipilih karena mengacu pada hasil penelitian

Dewi (2013), toksisitas ekstrak metanol daun muda A. microcarpa hasil inokulasi

isolat jamur asal Papua sebesar 26.47 μg/mL dan memenuhi kriteria berpotensi

antikanker. Pelarut metanol bersifat universal, yaitu dapat menarik sebagian besar

senyawa kimia. Metanol adalah alkohol paling sederhana yang memiliki gugus

polar ( OH) dan gugus nonpolar ( CH3). Hal inilah yang membuatnya mampumenarik analit dengan polaritas yang bervariasi.

Daun dibuat simplisia dengan tujuan memperluas bidang kontak sampel

dengan pelarut agar ekstraksi berjalan optimal. Maserasi simplisia dilakukan

dalam pelarut metanol (1:10) selama 3×24 jam dengan bantuan pengadukan

beberapa kali. Pengadukan ini akan membantu kontak pelarut dengan sampel

sehingga mempercepat proses ekstraksi. Filtrat yang dihasilkan selanjutnya

dipekatkan dengan penguap putar. Penguap putar akan menurunkan titik didih

pelarut dengan cara menurunkan tekanan menggunakan bantuan pompa vakum

sehingga pelarut lebih mudah diuapkan. Labu ditempatkan pada penangas air dan

diputar untuk meredam gejolak larutan dan menjamin pencampuran dan proses

transfer kalor berlangsung secara merata. Ekstrak kasar (crude extract ), yang

tersisa dalam labu diperoleh sebesar 11.93% (Lampiran 3a). Rendemen ini

menentukan jumlah metabolit sekunder yang terbawa oleh metanol dari simplisia

daun kering yang digunakan. Nilai ini lebih tinggi daripada hasil yang dilaporkan

oleh Dewi (2013), yaitu 4.99%. Hal ini dapat disebabkan oleh populasi sampel

yang berbeda, faktor iklim, dan kondisi hara saat pengambilan sampel pada waktu

yang berbeda, sehingga memengaruhi kandungan metabolit sekundernya.


20/41

6

Fraksionasi

Fraksionasi adalah pemisahan golongan senyawa yang satu dari golongan

yang lain dalam suatu campuran (Day dan Underwood 2002). Pemisahan

golongan senyawa dalam ekstrak kasar daun A. microcarpa dilakukan secarakromatografi kolom. Kolom kaca dengan cerat pada salah satu ujungnya diisi

dengan fase diam silika gel, lalu ekstrak dituangkan ke atasnya. Pelarut (eluen)

sebagai fase gerak lalu dibiarkan mengalir melalui kolom dengan dorongan gaya

gravitasi. Komponen dengan afinitas yang lebih besar terhadap adsorben secara

selektif akan lebih tertahan dibandingkan dengan komponen yang afinitasnya

kecil yang lebih mudah terbawa bersama eluen. Dengan cara ini, pemisahan

terjadi (Hendayana 2006). Pemisahan golongan senyawa dilakukan secara

gradien, yaitu selama proses elusi polaritas fase gerak terus ditingkatkan. Gambar

1 menunjukkan diagram rendemen fraksi-fraksi yang diperoleh dengan varian

eluen yang digunakan. Data lengkap rendemen fraksi dapat dilihat pada Lampiran

3b.

Gambar 1 Diagram rendemen fraksi-fraksi ekstrak metanol daun A. microcarpa

hasil inokulasi, menggunakan kolom silika gel dengan varian eluen

Fraksionasi memisahkan komponen-komponen dalam ekstrak daun muda A.

microcarpa berdasarkan tingkat kepolarannya. Eluen diklorometana, metanol, dan

air berturut-turut memiliki indeks polaritas sebesar 3.1, 6.6, dan 10.2 (Reichardt

dan Welton 2010). Oleh karena itu, fraksi diklorometana akan mengandung

senyawa-senyawa yang bersifat nonpolar dan fraksi diklorometana-metanol 1:1

mengandung senyawa-senyawa semipolar. Sementara itu, senyawa-senyawa polar

akan terdapat dalam fraksi metanol dan senyawa-senyawa yang sangat polarterpisah pada fraksi metanol-air 1:1. Sisa ekstrak di dalam kolom sebanyak

11.91%. Rendemen tertinggi diperoleh fraksi diklorometana-metanol 1:1, yaitu

sebesar 39.60%, yang menunjukkan bahwa ekstrak daun muda A. microcarpa

hasil inokulasi lebih banyak mengandung senyawa semipolar. Keempat fraksi

yang diperoleh lalu ditapis aktivitas antioksidannya dengan metode DPPH.

Aktivitas Antioksidan

Antioksidan adalah bahan yang beraktivitas mencegah atau menghambat

kerusakan sel akibat reaksi oksidasi oleh radikal bebas (Huda et al . 2009).

20.53%

39.60%

20.75%

7.21%

11.91%

FA (Fraksi diklorometana)

FB (Fraksi diklorometana-metanol 1:1)

FC (Fraksi metanol)

FD (Fraksi metanol-air 1:1)

P (Pengotor)

FA

FC

FD PFB


21/41

7

Aktivitas suatu ekstrak sebagai antioksidan antara lain dapat diketahui dengan

menggunakan metode DPPH. Senyawa DPPH menerima transfer radikal hidrogen

dari antioksidan membentuk molekul hidrazina dan terbentuk radikal baru dari

molekul antioksidan yang kereaktifannya rendah (Gambar 2).

Gambar 2 Reaksi DPPH dengan antioksidan (Amic et al . 2003)

Metode DPPH merupakan metode pengukuran antioksidan yang sederhana,

cepat, dan tidak membutuhkan banyak pereaksi. Molekul DPPH adalah radikal

bebas yang stabil karena elektron yang tidak berpasangan didelokalisasi ke

keseluruhan molekul sehingga tidak terjadi dimerisasi seperti pada radikal bebasumumnya. Delokalisasi ini juga menyebabkan molekul dalam larutan berwarna

ungu, ditandai dengan serapan maksimum pada λ 515 nm. Jika larutan DPPH

bereaksi dengan suatu zat yang mampu mendonorkan atom hidrogen, maka

dihasilkan suatu bentuk tereduksi (2,2-difenil-1-pikrilhidrazina) yang ditunjukkan

dengan hilangnya warna ungu (atau perubahan ke kuning pucat akibat masih

adanya gugus pikril). Perubahan tersebut diukur dengan spektrofotometer dan

dialurkan terhadap konsentrasi sehingga aktivitas peredaman radikal bebas dapat

ditentukan (Molyneux 2004). Tabel 1 menunjukkan hasil uji aktivitas antioksidan

untuk ekstrak kasar dan fraksi-fraksinya. Perhitungan IC50 disajikan pada

Lampiran 4.

Tabel 1 Aktivitas antioksidan ekstrak kasar dan hasil fraksionasi

SampelIC50

(μg/mL)

Vitamin C (kontrol positif) 3.49

Ekstrak kasar 68.99

Fraksi diklorometana 3244.54

Fraksi diklorometana-metanol 1:1 39.69

Fraksi metanol 25.89

Fraksi metanol-air 1:1 54.48

Hasil uji menunjukkan adanya senyawa aktif antioksidan pada ekstrak

kasar daun muda A. microcarpa hasil inokulasi sebab IC50 yang diperoleh sebesar

DPPH

Antioksidan

Hidrazina

Radikal


22/41

8

68.99 μg/mL, memenuhi kriteria IC50 ekstrak kasar di bawah 200 μg/mL yang

berpotensi sebagai antioksidan (Molyneux 2004). Komponen aktif antioksidan

dalam ekstrak ini berada dalam rentang senyawa semipolar sampai sangat polar,

sebab ketiga fraksi pada tingkat kepolaran tersebut memiliki nilai IC50 di bawah

200 μg/mL. Hanya fraksi diklorometana yang tidak memiliki aktivitasantioksidan. Aktivitas tertinggi dihasilkan fraksi metanol dengan IC50 sebesar

25.89 μg/mL. Aktivitas antioksidan fraksi ini lebih kuat dibandingkan dengan

ekstrak kasarnya karena senyawa berada dalam kondisi yang lebih murni oleh

pemisahan dengan kromatografi kolom berdasarkan tingkat kepolaran. Namun,

aktivitas tersebut belum sebaik standar vitamin C sebagai antioksidan komersial

yang nilai IC50-nya 3.49 μg/mL. Hal ini dikarenakan aktivitas komponen aktif

antioksidan dalam fraksi metanol tersebut dipengaruhi oleh senyawa yang masih

banyak terbawa oleh metanol dari ekstrak kasarnya.

Analisis GC-MS

Analisis GC-MS adalah metode yang menggabungkan fitur dari

kromatografi gas (GC) dan spektroskopi massa (MS) untuk mengidentifikasi

komponen kimia dalam sampel uji. GC-MS terdiri atas 2 bagian: bagian GC yang

memisahkan campuran ke dalam komponen-komponennya dan bagian MS yang

mengidentifikasi dan mengkuantifikasi komponen-komponen tersebut. Setelah

sampel melewati GC, komponen kimia diteruskan ke MS. Molekul ditembak oleh

elektron dan terpecah menjadi fragmen-fragmen yang kemudian berubah menjadi

partikel bermuatan positif. Ion-ion ini kemudian bergerak melewati medan

elektromagnetik yang akan menyaring ion berdasarkan massanya. Ion-ion lalu

memasuki detektor dan jumlah ion dengan massa tertentu akan dihitung.Informasi ini dikirim ke komputer dan spektrum massa dibuat, berupa hubungan

jumlah ion dengan massanya yang telah bergerak melalui filter (Hamid et al .

2011). Spesifikasi dan kondisi alat GC-MS dapat dilihat pada Lampiran 5.

Fraksi metanol dianalisis dengan GC-MS karena memiliki aktivitas

antioksidan tertinggi dari keempat fraksi yang diperoleh. Identifikasi komponen

kimia didasarkan pada spektrum massa komponen yang dicocokkan dengan

pustaka National Institute of Standard and Technology (NIST) pada perangkat

lunak GC-MS. Kromatogram GC-MS dapat dilihat pada Lampiran 6. Hasil

analisis memperlihatkan adanya 24 senyawa, tetapi 4 senyawa di antaranya

memilii tigt eirip spetru ˂72% (Lampiran 7). Tabel 2 menunjukkan

senyawa-senyawa hasil analisis dengan tingkat kemiripan spektrum ≥72%.

Komponen utama fraksi metanol ekstrak daun muda A. microcarpa adalah

heneikosana, dengan persen total tertinggi sebesar 7.81%. Heneikosana

merupakan feromon penting yang dilaporkan berpengaruh kuat pada proses

oviposit nyamuk Aedes spp, sehingga dapat mengendalikan penyebaran penyakit

berbahaya yang diakibatkan oleh nyamuk tersebut, seperti demam berdarah dan

cikungunya (Mendki et al . 2000). Komponen utama lain yang teridentifikasi di

antaranya adalah 13,17,21-trimetilpentatriakontana, 8-(2-oktilsiklopropil)oktanal,

dan asam-asam lemak seperti asam oktadekanoat dan asam heksadekanoat.

Senyawaan alkaloid teridentifikasi sebagai komponen minor, di antaranya adalah


23/41

9

2,4,5-trioksoimidazolidina, 5-nitropirimidina-2,4-diol, dan asam N -(3,5-dinitro-2-

piridinil)aspartat.

Tabel 2 Profil kimia fraksi metanol ekstrak daun muda A. microcarpa hasil

inokulasi

No

Waktu

retensi

(menit)

Luas

Persen

total

(%)

SenyawaRumus

molekul

1 7.447 368 800 0.22 2,4,5-Trioksoimidazolidina C3H2 N2O3

2 9.450 361 031 0.22 5-Nitropirimidina-2,4-diol C4H3 N3O4

3 10.213 167 424 0.10Asam N -(3,5-dinitro-2-

piridinil)aspartatC9H8 N4O8

4 14.900 6 815 227 4.12 Asam heksadekanoat C16H32O2

5 17.721 1 318 574 0.80Asam trans-13-

oktadekenoatC

18H

34O

2

6 18.125 5 575 616 3.37 Asam oleat C18H34O2

7 18.686 3 931 889 2.38 Metil palmitat C17H34O2

8 19.958 5 324 487 7.04 Asam oktadekanoat C18H36O2

9 20.359 8 369 753 5.068-(2-

Oktilsiklopropil)oktanalC19H36O

10 20.588 3 568 477 2.16 Metil stearat C19H38O2

11 21.167 3 902 915 2.36 Asam cis-vaksenat C18H34O2

12 21.526 11 353 647 6.8613,17,21-

TrimetilpentatriakontanaC38H78

13 22.104 2 068 898 4.38 1-Heksakosena C26H52 14 22.564 1 010 454 1.72 cis-1-kloro-9-oktadekena C18H35Cl

15 24.742 3 626 475 2.19 Tetrapentakontana C54H110

16 25.746 3 870 798 2.76Oktatriakontil

pentafluoropropionatC41H77F5O2

17 26.231 2 050 185 1.24 Oktadesil trifluoroasetat C30H57F3O2

18 26.663 325 438 0.20Dokosil

pentafluoropropanoatC25H45F5O2

19 27.600 12 922 296 7.81 Heneikosana C21H44

20 28.308 417 846 0.25 1-Heksakosanol C26H54O

Aktivitas antioksidan fraksi metanol dirasionalisasi dari struktur molekul

alkaloid aromatik yang dikandungnya (Gambar 3). Senyawa 5-nitropirimidina-

2,4-diol dan asam N -(3,5-dinitro-2-piridinil)aspartat mampu menyumbangkan

atom hidrogen dari subsituen aromatiknya ke radikal DPPH dan menghasilkan

radikal yang terstabilkan oleh resonansi sehingga menjadi tidak reaktif. Dengan

demikian, senyawa fenolik dan alkaloid amina sekunder aromatik ini diduga

berkontribusi dalam keaktifan antioksidan yang dimiliki fraksi metanol ekstrak

daun muda A. microcarpa hasil inokulasi.


24/41

10

Gambar 3 Dugaan senyawa aktif antioksidan dalam fraksi metanol ekstrak daun

muda A. microcarpa hasil inokulasi: 1) alkaloid fenolik (5-

nitropirimidina-2,4-diol) dan 2) alkaloid amina sekunder aromatik

(asam N -(3,5-dinitro-2-piridinil)aspartat) (Brown 2009)

SIMPULAN DAN SARAN

Simpulan

Daun muda pohon penghasil gaharu Aquilaria microcarpa hasil inokulasi

berpotensi sebagai sumber antioksidan karena fraksi metanol dari ekstrak daun

tersebut memiliki IC50 yang baik sebesar 25.89 μg/mL. Hasil analisis GC-MS

memperlihatkan adanya 24 senyawa yang teridentifikasi di dalam fraksi metanol,

di antaranya adalah senyawa fenolik, yaitu 5-nitropirimidina-2,4-diol dan alkaloid

amina sekunder aromatik, yaitu asam N -(3,5-dinitro-2-piridinil)aspartat yang

diduga berperan sebagai senyawa antioksidan.

Saran

Aktivitas antioksidan lazim dihubungkan dengan manfaatnya dalam terapi

kanker. Disarankan pengujian toksisitas fraksi aktif antioksidan yang diperoleh

agar diketahui potensi antikankernya. Penelitian lebih lanjut dapat dilakukan

untuk isolasi dan pemurnian menggunakan KCKT preparatif sehingga diperoleh

senyawa bioaktif yang murni dan dapat dielusidasi struktur molekulnya dengan

NMR dan instrumen pendukung lainnya sehingga dapat dibandingkan hasilnya

dengan senyawa yang diperoleh dari hasil analisis GC-MS.

1 2


25/41

11

DAFTAR PUSTAKA

[AOAC] Association of Official Analytical Chemists. 2006. Official Methods of

Analysis. Ed ke-18. Washington DC (US): AOAC.Amic D, Beslo D, Trinajstic N. 2003. Structure-radical scavenging activity

relationships of flavonoids. Croatia Chem Acta. 76(1):55-61.

Ariffin SHZ, Haryani WH, Omar W, Ariffin ZZ, Safian MF, Senafi S, Wahab

RMA. 2009. Intrinsic anticarcinogenic effects of Piper sarmentosum

ethanolic extract on a human hepatoma cell line. Cancer Cell Int Primary

Res. 9(6):1-9.

Bhuiyan NI, Begum J, Bhuiyan NH. 2004. Analysis of essential oil of eaglewood

tree by gas chromatography mass spectrometry. Bangladesh J Pharmacol .

4:24-28.

Brown DJ. 2009. The Chemistry of Heterocyclic Compound . New York (US): J

Wiley.[CITES] Convention on International Trade in Endangered Species of Wild Fauna

and Flora. 2004. Amendments to Appendices I and II of CITES. Thirteenth

Meeting of the Conference of the Parties. Bangkok (TH): CITES.

Chang YS, Nor AMA, Mailina J, Abu SA, Abdul MJ, Saidatul HS, Nor HH, Nik

YY. 2008. Comparison of chemical profiles of selected gaharu oils from

Peninsular Malaysia. Malaysian J Anal Sci. 12(2):338-340.

Day RA, Underwood AL. 2002. Analisis Kimia Kuantitatif . Sopyan I,

penerjemah; Wibi H, Simarmata L, editor. Jakarta (ID): Erlangga.

Terjemahan dari: Quantitative Analysis. Ed ke-6.

Dewi KS. 2013. Toksisitas dan aktivitas antioksidan ekstrak daun pohon

penghasil gaharu hasil inokulasi [skripsi]. Bogor (ID): Institut PertanianBogor.

Hamid AA, Aiyelaagbe OO, Usman LA. 2011. Essential oils: its medicinal and

pharmacological uses. Int J Curr Res. 3(2):86-98.

Hrboure N, Mrete E, Jcquire JC, O’iord D. 2013. Conventional extraction

techniques for phytochemicals. Di dalam: Tiwari BK, Brunton NP, Brennan

CS, editor. Handbook of Plant Food Phytochemicals: Sources, Stability, and

Extraction. New Jersey (US): Wiley-Blackwell.

Hendayana S. 2006. Kimia Pemisahan Metode Kromatografi dan Elektroforesis

Modern. Bandung (ID): Remaja Rosdakarya.

Herawati, Nuraida L, Sumarto. 2012. Cara Produksi Simplisia yang Baik . Bogor

(ID): IPB Pr.

Huda AWN, Munira MAS, Fitrya SD, Salmah M. 2009. Antioxidant activity of

Aquilaria malaccensis (Thymelaeaceae) leaves. Pharmacogn Res. 1(5):270-

273.

Ichzan AM. 2014. Pemrofilan kandungan metabolit sekunder temu hitam

(Curcuma aeroginosa) dengan kromatografi gas-spektroskopi massa dan

kemometrik [skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.

Iswani S. 2014. Isolasi senyawa antitumor dari karang lunak Sarcophyton sp.

Kepulauan Seribu [skripsi]. Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.


26/41

12

Lisdawati V, Wiryowidagdo S, Kardono LBS. 2006. Bioasai in vitro antikanker

terhadap sel leukemia L1210 dari berbagai fraksi ekstrak daging buah dan

kulit biji mahkota dewa ( Phaleria macrocarpa). JBAI . 5(1):303-309.

Mendki MJ, Ganesan K, Prakash S, Suryanarayana MVS, Malhotra RC, Rao KM,

Vaidyanathaswamy R. 2000. Heneicosane: an oviposition attractant pheromone of larval origin in Aedes aegypti mosquito. Current Science.

78(11):1295-1296.

Molyneux P. 2004. The use of the stable free radical diphenylpicrylhydrazyl

(DPPH) for estimating antioxidant activity. Songklanakarin J Sci Technol .

26(2):211-219.

Novriyanti E. 2008. Peranan zat ekstraktif dalam pembentukan gaharu pada

Aquilaria crassna Pierre ex Lecomte dan Aquilaria microcarpa Baill [tesis].

Bogor (ID): Institut Pertanian Bogor.

Reichardt C, Welton T. 2010. Solvents and Solvent Effects in Organic Chemistry.

Ed ke-4. New York (US): J Wiley.

Seidel V. 2005. Initial and bulk extraction. Di dalam: Sarker SD, Latif Z, Gray AI,editor. Methods In Biotechnology. Vol 20. Natural Product Isolation. Ed ke-

2. New Jersey (US): Humana Pr. hlm 27-46.

Simanjuntak P. 2007. Strategi pencarian senyawa bioaktif baru dari sumber bahan

alami tumbuhan. JIFI . 1(2):19-23.

Siran SA. 2010. Perkembangan pemanfaatan gaharu. Di dalam: Siran SA,

Turjaman M, editor. Pengembangan Teknologi Produksi Gaharu Berbasis

Pemberdayaan Masyarakat Sekitar Hutan. Bogor (ID): Pusat Penelitian dan

Pengembangan Hutan dan Konservasi Alam. hlm 1-34.

Winarno FG. 2012. Kimia Pangan dan Gizi. Jakarta (ID): Gramedia.


27/41

13

Lampiran 1 Diagram alir penelititan

Daun muda

A. microcarpa hasil inokulasi

Dikeringkan dan digiling

Difraksionasi dengan kromatografi kolom

Diuji antioksidan dengan metode DPPH

Fraksi-fraksi

Ditentukan kadar airnya

Dimaserasi dengan metanol

Dipekatkan dengan penguap putar

Diuji antioksidan dengan metode DPPH

Fraksi teraktif

Profil kimia

Dianalisis GC-MS

Ekstrak kasar

Simplisia

Residu


28/41

14

Lampiran 2 Kadar air simplisia daun muda A. microcarpa hasil inokulasi

UlanganBobot cawan

kosong (g)

Bobot cawan + sampel (g) Bobot sampel (g) Kadar air

(%)Awal Akhir Awal Akhir

1 18.5642 19.5652 19.5199 1.0010 0.9557 4.52

2 18.9603 19.9605 19.9164 1.0002 0.9561 4.41

3 27.4296 28.4299 28.3861 1.0003 0.9565 4.38

Rerata 4.44

Contoh perhitungan:

dr ir bobot spe bobot spe hir

bobot spe 100

dr ir (1.0010 0.9557) g

1.0010 g 100

dr ir 4.52

ert 4.52 4.41 4.38

3 4.44


29/41

15

Lampiran 3 Rendemen ekstrak dan fraksi

3. a Rendemen ekstrak metanol daun muda A. microcarpa hasil inokulasi

Contoh perhitungan:

edee estr bobot estr

bobot spe 100 dr ir 100

edee estr 31.9189 g

280.0000 g 100 4.44 100

edee estr 11.93

3. b Rendemen fraksi ekstrak metanol daun muda A. microcarpa hasil inokulasi

Sampel Bobot ekstrak (g) Bobot fraksi (g) Rendemen (%)

Fraksi A

12.1166

2.4875 20.53

Fraksi B 4.7983 39.60

Fraksi C 2.5140 20.75

Fraksi D 0.8739 7.21

Contoh perhitungan:

edee frsi bobot frsi

bobot estr 100

edee frsi 2.4875 g

12.1166 g 100

edee frsi 20.53

Keterangan: Fraksi A = fraksi diklorometana

Fraksi B = fraksi diklorometana-metanol 1:1

Fraksi C = fraksi metanol

Fraksi D = fraksi metanol-air 1:1

Sampel Bobot sampel (g) Bobot ekstrak (g) Rendemen (%)

Ekstrak 280.0000 31.9189 11.93


30/41

16

Lampiran 4 Hasil uji antioksidan metode peredaman radikal bebas DPPH

4. a Asam askorbat (kontrol positif)

Konsentrasi

(µg/mL)

Absorbans Absorbans

rerata % inhibisi ln KonsentrasiUlangan 1 Ulangan 2

Blangko 0.7550 0.7550 0.7550 0.00 -

3 0.4290 0.4250 0.4270 43.44 2.9957

6 0.2540 0.2610 0.2575 65.89 3.6889

9 0.0470 0.0450 0.0460 93.91 4.0943

12 0.0300 0.0320 0.0310 95.89 4.3280

15 0.0240 0.0200 0.0220 97.09 4.6052

Contoh perhitungan:

ihibisi bsorbs bgo bsorbs spe

bsorbs bgo 100

ihibisi 0.7550 0.4270

0.7550 100

ihibisi 43.44

Persamaan regresi linear: y = 36.3060 x + 4.5937

IC50 diperoleh saat y = 50, sehingga 50 = 36.3060 x + 4.5937, maka

50 4.5937

36.3060 1.2507 1.2507 1.2507 3.49

Jadi IC50 = 3.49 µg/mL

y = 36.3060 x + 4.5937

R² = 0.9377

0

20

40

60

80

100

120

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3

% inhibisi

ln konsentrasi


31/41

17

lanjutan Lampiran 4

4. b Ekstrak metanol daun muda A. microcarpa hasil inokulasi

Konsentrasi

(µg/mL)

Absorbans Absorbans

rerata

% inhibisi ln Konsentrasi

Ulangan 1 Ulangan 2Blangko 0.3840 0.3840 0.3840 0.00 -

20 0.3340 0.3280 0.3310 13.80 1.0986

40 0.2670 0.2730 0.2700 29.69 1.7918

60 0.2250 0.2230 0.2240 41.67 2.1972

80 0.1880 0.1710 0.1795 53.26 2.4849

100 0.1390 0.1260 0.1325 65.49 2.7081

Contoh perhitungan:


bsorbs bgo 100

ihibisi 0.3840 0.3310

0.3840

100

ihibisi 13.80

Persamaan regresi linear: y = 31.6110 x 83.8410

IC50 diperoleh saat y = 50, sehingga 50 = 31.6110x 83.8410, maka

50 83.8410

31.6110 4.2340 4.2340 4.2340 68.99


y = 31.6110 x 83.8410 R² = 0.9705

0

10

20

30

40

50

60

70

0 1 2 3 4 5

% inhibisi

ln konsentrasi


32/41

18

lanjutan Lampiran 4

4. c Fraksi diklorometana

Konsentrasi

(µg/mL)

Absorbans Absorbans


Blangko 0.7550 0.7550 0.7550 0.00 -

5 0.6840 0.7010 0.6925 8.28 1.6094

10 0.6540 0.6750 0.6645 11.99 2.3026

25 0.6490 0.6590 0.6540 13.38 3.2189

50 0.6230 0.6110 0.6170 18.28 3.9120

100 0.5210 0.5180 0.5195 31.19 4.6052

Contoh perhitungan:


bsorbs bgo 100

ihibisi

0.7550 0.6925

0.7550 100

ihibisi 8.28


IC50 diperoleh saat y = 50, sehingga 50 = 6.7357 x 4.4563, maka

50 4.4563

6.7357 8.0847 8.0847 8.0847 3244.54


y = 6.7357 x 4.4563

R² = 0.8303

0

5

10

15

20

25

30

35

0 1 2 3 4 5

% inhibisi

ln konsentrasi


33/41

19

lanjutan Lampiran 4

4. d Fraksi diklorometana-metanol 1:1

Konsentrasi

(µg/mL)

Absorbans Absorbans


Blangko 0.7550 0.7550 0.7550 0.00 -

5 0.6670 0.6840 0.6755 10.53 1.6094

10 0.6360 0.6690 0.6525 13.58 2.3026

25 0.5140 0.5260 0.5200 31.13 3.2189

50 0.4290 0.3990 0.4140 45.17 3.9120

100 0.1060 0.1230 0.1145 84.83 4.6052

Contoh perhitungan:


bsorbs bgo 100

ihibisi

0.7550 0.6755

0.7550 100

ihibisi 10.53



50 36.4610

23.4880 3.6811 3.6811 3.6811 39.69


y = 23.4880 x 36.4610

R² = 0.8784

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

0 1 2 3 4 5

% inhibisi

ln konsentrasi


34/41

20

lanjutan Lampiran 4

4. e Fraksi metanol

Konsentrasi

(µg/mL)

Absorbans Absorbans


Blangko 0.7550 0.7550 0.7550 0.00 -

5 0.6890 0.6970 0.6930 8.21 1.6094

10 0.6200 0.6200 0.6200 17.88 2.3026

25 0.4280 0.4270 0.4275 43.38 3.2189

50 0.2340 0.1900 0.2120 71.92 3.9120

100 0.0700 0.0700 0.0700 90.73 4.6052

Contoh perhitungan:


bsorbs bgo 100

ihibisi

0.7550 0.6930

0.7550 100

ihibisi 8.21



50 43.6710

28.7880 3.2538 3.2538 3.2538 25.89


y = 28.7880 x 43.6710

R² = 0.9802

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

0 1 2 3 4 5

% inhibisi

ln konsentrasi


35/41

21

lanjutan Lampiran 4

4. f Fraksi metanol-air 1:1

Konsentrasi

(µg/mL)

Absorbans Absorbans


Blangko 0.7550 0.7550 0.7550 0.00 -

5 0.7050 0.7060 0.7055 6.56 1.6094

10 0.6890 0.6760 0.6825 9.60 2.3026

25 0.5810 0.5900 0.5855 22.45 3.2189

50 0.4620 0.4490 0.4555 39.67 3.9120

100 0.1810 0.1790 0.1800 76.16 4.6052

Contoh perhitungan:


bsorbs bgo 100

ihibisi

0.7550 0.7055

0.7550 100

ihibisi 6.56



50 38.0040

22.0130 3.9978 3.9978 3.9978 54.48


y = 22.0130 x 38.0040

R² = 0.8655

-10

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

0 1 2 3 4 5

% inhibisi

ln konsentrasi


36/41

22

Lampiran 5 Spesifikasi dan kondisi alat GC-MS

Kondisi GC Spesifikasi dan program

Kolom

Tipe Kolom kapiler GC J&W tipe HP-5ms,

30 mm × 0.25 mm, eteb 0.25 μ

Model aliran Konstan

Laju alir 1.00 μL/eit

Instrumen GC-MS

GC Agilent GC seri 7890

Gas pembawa Helium

Detektor Agilent MS seri 6950

Mode ionisasi Ionisasi tumbukan elektron 70 eV

InjektorTipe Manual

Volume Injeksi 2.00 μL

Inlet

Suhu 250 ⁰C

Teknik injeksi Split

Suhu Oven

Suhu awal 40 ⁰C

Waktu awal 5 menit

Waktu operasi 30 menit

Program Suhu

Suhu awal 40 ⁰C ditahan selama 2 menit

Laju kenaikan suhu 10 ⁰C/menit

Suhu akhir 280 ⁰C ditahan selama 2 menit


37/41

23

Lampiran 6 Kromatogram GC-MS fraksi metanol


38/41

24

Lampiran 7 Struktur senyawa-senyawa hasil analisis GC-MS

No Senyawa

Persen

kemiripan

spektrum

Struktur molekul

12,4,5-

Trioksoimidazolidina72

25-Nitropirimidina-2,4-

diol78

3Asam N -(3,5-dinitro-2-

piridinil)aspartat 79

4 Pentanal 64

52,5-Dioksopirolidina-1-

karboksimidamida47

6 N -Metil-1,3-dioksolana-

2-metanamina53

7 N -formildikarbonimida

diamida 49


39/41

25

lanjutan Lampiran 7

No Senyawa

Persen

kemiripan

spektrum

Struktur molekul

8 Asam heksadekanoat 92

9Asam trans-13-

oktadekenoat91

10 Asam oleat 91

11 Metil palmitat 96

12 Asam oktadekanoat 95

138-(2-

Oktilsiklopropil)oktanal95

14 Metil stearat 95

15 Asam cis-vaksenat 90

1613,17,21-

Trimetilpentatriakontana91


40/41

26

lanjutan Lampiran 7

No Senyawa

Persen

kemiripan

spektrum

Struktur molekul

17 1-Heksakosena 95

18cis-1-Kloro-9-

oktadekena93

19 Tetrapentakontana 93

20Oktatriakontil

pentafluoropropionat90

21 Oktadesil trifluoroasetat 92

22Dokosil

pentafluoropropanoat90

23 Heneikosana 96

24 1-Heksakosanol 83


41/41

27

RIWAYAT HIDUP

Penulis dilahirkan di Sukabumi pada tanggal 22 Januari 1989 sebagai putra

pertama dari Bapak Muksin dan Ibu Hj. Yati Haryati. Penulis lulus dari SMA Negeri 1 Cibadak Sukabumi pada tahun 2007 dan pada tahun yang sama diterima

di program D-3 Akademi Kimia Analisis (AKA), Bogor. Penulis lulus dari AKA

Bogor dengan predikat Sangat Memuaskan pada tahun 2010. Penulis selanjutnya

bekerja di PT Firmenich Indonesia dan kemudian berkesempatan melanjutkan

pendidikan S-1 melalui program Alih Jenis di Departemen Kimia, Fakultas

Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Institut Pertanian Bogor (IPB) pada

tahun 2012. Selama mengikuti perkuliahan, penulis pernah menjadi asisten

praktikum Kimia Dasar untuk mahasiswa Tingkat Persiapan Bersama IPB.

Penulis juga pernah berpartisipasi sebagai staf Deputi Syiar bidang Moslem Study

Centre pada Lembaga Dakwah Kampus AKA Bogor. Penulis melakukan praktik

kerja lapangan di PT Asahimas Chemical dengan judul laporan Validasi MetodePenetapan Residual Vinyl Chloride Monomer (RVCM) dalam Resin Polyvinyl

Chloride (PVC) secara Kromatografi Gas Teknik Headspace. Beberapa pelatihan

yang pernah diikuti antara lain Pelatihan Pengantar Sistem Manajemen Mutu

(ISO 9001:2008), Pelatihan Pengantar Sistem Manajemen Lingkungan (ISO

14001:2008), dan Advanced Workshop for Capacity Building on the Globally

Harmonized System (GHS) of Classification and Labelling of Chemicals.

Profil Kimia Fraksi Aktif Antioksidan Dari Ekstrak Metanol Daun Pohon Penghasil Gaharu Aquilaria Microcarpa Hasil Inokulasi

Documents