PRESENTASI_KROMATOGRAFI CAIR – PADAT

8/13/2019 PRESENTASI_KROMATOGRAFI CAIR PADAT

1/20

KROMATOGRAFI

CAIRPADAT

Kelompok : 5

Harisya Muchni

Ririn Vidiastuti

Susianah


2/20

KROMATOGRAFI CAIR PADAT

Kromatografi Cair Padat atau Liquid

Solid Chromatography disebut jugakromatografi penyerapan.

Kromatografi kolom dan kromatografilapis tipis (TLC) merupakan teknik

pemisahan yang masuk golongan ini.


3/20

BAGAN ALAT KROMATOGRAFI

CAIR PADAT

A basic LC system consists of

(a) a solvent inlet filter, (b) pump, (c)inline solvent filter, (d) injection valve,(e) precolumn filter, (f) column, (g)detector, (h) recorder, (i) backpressureregulator, and (j) waste reservoir.


4/20

CARA KERJA ALAT

Pelarut inlet membawa fasa gerak

yang kemudian dipompa melaluifilter pelarut inline dan akan

melewati katup injeksi. Fasa gerak

akan bercampur dengan sampel yang

telah diinjeksikan

Campuran tersebut akan melewati

filter lainnya dan melewati kolom

sehingga komponen-komponensampel akan terpisah.

Detektor akan mendeteksi

pemisahan analat dan merekamnya,

biasanya komputer yang akan

merekan informasi tersebut.

Sampel akan akan ke backpressure

filter dan menjadi waste.


5/20

PEMISAHAN YANG TERJADI


6/20

MEKANISME PEMISAHANMekanisme pemisahan yang dapat

digunakan pada kromatografi cair

padat ini antara lain :

1. Adsorpsi

2. Pertukaran Ion

3. Saringan Molekular

4. Reaksi Selektif


7/20

MEKANISME PEMISAHAN

1. Adsorpsi

Terjadinya pemisahan ialah akibat

gaya tarik fasa stasioner yang kuat

terhadap komponen komponen

yang harus dipisahkan. Gaya tarik

yang kuat ini disebabkan oleh

interaksi kimiawi dan atau interaksi

Van Der Walls.


8/20

MEKANISME PEMISAHAN2. Pertukaran Ion

Pertukaran kation (cation exchange). Pada

pertukaran kation, fase stasionerbermuatan negatif.

Pertukaran anion (anion exchange). Pada

pertukaran anion, fase stasioner

bermuatan positif.

Molekul bermuatan yang berada pada fase

cair akan melewati kolom. Jika muatanpada molekul sama dengan kolom, maka

molekul tersebut akan terelusi. Namun

jika muatan pada molekul tidak sama

dengan kolom, maka molekul tersebutakan membentuk ikatan ionik dengan

kolom. Untuk mengelusi molekul yang

menempel pada kolom diperlukan

penambahan larutan dengan pH dankekuatan ionik tertentu.


9/20

MEKANISME PEMISAHAN

3. Saringan Molekular

4. Reaksi Selektif


10/20

MEKANISME PEMISAHANTeknik yang dapat digunakan antara lain :

1. Kolom

2. Planar

Metode yang digunakan dalam

kromatografi cair padat :

1. Kromatografi CairPadat

Klasik(LSC)

2. KCKT (Kromatografi Cair Kinerja

Tinggi) / HPLC

3. KLT ( Kromatografi lapis Tipis) /TLC

4. KLTKT (Kromatografi Lapis Tipis

Kinerja Tinggi) / HPTLC

5. Kromatografi Pertukaran Ion

6. Kromatografi Ekslusi

7. Kromatografi Afinitas


11/20

MEKANISME PEMISAHANTeknik yang dapat digunakan antara lain :

1. Kolom

Digunakan untuk memisahkan senyawa-

senyawa berdasarkan adsorpsi dan partisi.

Adsorben yang sering digunakan adalahsilika gel G-60, kieselgur, dan Al2O3.

Cara pembuatannya yaitu cara kering dan

cara basah.


12/20

MEKANISME PEMISAHAN

2. Planar

Kromatografi planar mempunyai dua

bentuk, yaitu:

Kromatografi kertas

Kromatografi lapis tipis


13/20

MEKANISME PEMISAHAN

Lanjutan dari Planar . . .

Larutan cuplikan diteteskan pada

suatu titik pada permukaan fasa diam

planar.

Setelah pelarut menguap, kemudian

dikembangkan dengan fasa gerakmelalui permukaan tersebut dalam

ruang pengembang.

Gerakan fasa gerak sebagai akibatdari efek kapiler pada fasa diam.


14/20

FASA GERAK

Fasa gerak dalam kromatografi cair

padat adalah cair.

Pemilihan fasa gerak dalam

kromatografi padat cair (adsorpsi)

akan dengan baik tercapai denganmenggunakan parameter kekuatan

pelarut.


15/20

FASA DIAM

Fase diam adalah adsorben (fase

padat) dan pemisahan didasarkan

pada adsorpsi berulang dan desorpsi

bahan terlarut (analit).


16/20

DETEKTOR KROMATOGRAFI

CAIR - PADATSuatu detektor dibutuhkan untuk

mendeteksi adanya komponen

cuplikan dalam aliran yang keluar

dari kolom.

Detektor-detektor yang baikmemiliki sensitifitas yang tinggi,

gangguan (noise) yang rendah, kisar

respons linier yang luas, dan

memberi tanggapan/respon untuk

semua tipe senyawa.


17/20

ANALISA KUANTITATIF

KROMATOGRAFI CAIR - PADAT

Bertujuan untuk menentukan banyaknya

komponenkompenen dalam campuran.

Dengan kromatogram yang diperoleh dari

detektor diferensial yang mana memiliki

respon linier, penggantian/jarak dari garis

belakang pada saat tertentu adalah suatu

ukuran konsentrasi dari komponen dari

gas pembawa di saluran keluar kolom.

Kurva integral dihasilkan yakni area

puncak dari puncak adalah sebanding

dengan jumlah komponen yang ada.

Dalam kromatogram yang ideal dimana

puncak merupakan kurva Gaussian

simetrik lalu ketinggian puncak akan

sebanding dengan.

Area puncak adalah a konsentrasi

komponen bila Gaussian maka area a ketinggi puncak.


18/20

ANALISA KUANTITATIF


Setelah komponen dalam sampel

dipisahkan, maka hasil analisa diperolehdalam bentuk signal kromatogram.

Sampel yang mengandung banyak

komponen didalamnya akan memiliki

kromatogram dengan banyak peak.

Bahkan tak jarang antar peak saling

bertumpukj(overlap).

Untuk mengetahui peak mana yang

merupakan milik analat, kromatogram

dibandingkan dengan kromatogram

standar. Cara yang paling umum untuk

mengidentifikasinya adalah dengan

melihat retention time. Peak yang

memiliki retention timeyang sama dengan

standar umumnya adalah peak milik

analat.


19/20

ANALISA KUANTITATIF


Hal lain yang perlu dilihat adalah

spektrum 3D dari signal kromatogram.Zat yang sama akan memiliki spektrum

3D yang juga sama.

Jika spektrum 3D antara dua zat berbeda,

maka kedua zat tersebut adalah zat yang

berlainan, mekipun memiliki retention

time yang sama.


20/20

PEMILIHAN KONDISI


Secara umum kromatografi cair-

padat digunakan dalam kondisi-

kondisi berikut:

Pemisahan berbagai senyawa

biokimia dan organikTeknik pelaksanaanya dapat

dilakukan dengan kolom kaca,

dimana fasa diam dapat dipilihsilica gel atau alumina.

Pemilihan fase gerak dalam

kromatografi padat cair (adsorpsi)

akan dengan baik tercapai dengan

menggunakan parameter kekuatan

pelarut

PRESENTASI_KROMATOGRAFI CAIR – PADAT

Documents