PENUNTUN PRAKTIKUM

MIKROBIOLOGI DASAR

Disusun oleh :

Dra. Hj. Dewi Rusmiati

Dra. Hj. Sulistianingsih, M. Kes

Dr. Tiana Milanda, M.Si.

Sri Agung Fitri Kusuma, M.Si.

Tina Rostinawati, M.Si.

Dr. Med. Melisa Intan Barliana

UNIVERSITAS PADJADJARAN

FAKULTAS FARMASI

LABORATORIUM MIKROBIOLOGI

JATINANGOR

2015

KATA PENGANTAR

Penuntun Praktikum Mikrobologi Dasar ini disusun sebagai penuntun

bagi para mahasiswa dalam melakukan praktikum Mikrobiologi Dasar di

FakuItas Farmasi Universitas Padjadjaran. Tujuan utamanya adalah membantu

para mahasiswa Farmasi dalam mempelajari teknik dan prosedur dasar

laboratorium mikrobiologi.

Materi praktikum Mikrobiologi Dasar meliputi pengenalan mikroskop,

tcknikpewarnaan, penyiapan alat dan media, pengenalan berbagai sifat fisiologis

bakteri sertacara identifikasi bakteri. Materi-materi tersebut disusun dari

berbagai buku Mikrobiologi Dasar, baik teori maupun penuntun praktikum.

Penyusun menyadari bahwa buku ini masih jauh dari sempurna, namun

demikian diharapkan tetap dapat membantu mahasiswa atan siapa saja yang

berminat pada bidang mikrohiologi. Akhir kata, tegur sapa dan koreksi untuk

perbaikan buku kami sangat harapkan.

Jatinangor, 2015

Penyusun

TATA TERTIB DAN BENTUK LAPORAN

TATA TERTIB LABORATORIUM

Untuk mencegah kontaminasi alat dan bahan serta melindungi diri dari

kecelakaan di laboratorium, para mahasiswa diwajibkan mematuhi tata tertib

laboratorium sebagai berikut :

1. Baca dan pelajari praktikum yang akan dikerjakan, sebelum memasuki

laboratorium.

2. Letakkan tas dan benda-benda lain yang tidak diperlukan di tempat yang

tersedia. Gunakan jas laboratorium selama bekerja di laboratorium.

3. Bersihkan meja laboratorium dengan desinfektan sebelum dan sesudah

praktikum.

4. Cuci tangan dengan air dan sabun sebelum dan sesudah praktikum.

5. Jangan makan, minum atau merokok di laboratorium. Jauhkan tangan dan

mulut, hidung dan telinga selama praktikum.

6. Perlakukan semua mikroorganisme sebagai patogen (mampu menimbulkan

penyakit) Tidak diperkenankan membawa keluar biakan mikroorganisrne dari

laboratorium.

7. Usahakan biakan mikroorganisme tidak tercecer dan tidak tercampur dengan

mikroorganisme lain. Jika tercecer, tuangkan desinfektan di atasnya, biarkan

beberapa menit, lalu bersihkan dengan kertas isap. Jika tabung berisi

mikroorganisme pecah, tuangkan desinfektan ke atasnya, biarkan beberapa

menit, buang ke tempat sampah.

8. Jika mahasiswa terkontaminasi atau terluka, hubungi segera asisten

laboratorium.

9. Ose harus disterilkan dengan memijarkan seluruh kawatnya sebelum dan

sesudah digunakan.

10. Jika pipet yang sama digunakan lebih dan satu kali, letakkan pada penyangga

rak tabung reaksi.

11. Api pada pembakar spirtus harus dimatikan, jika tidak digunakan.

12. Biakan yang sudah tidak diperlukan harus diserahkan kepada asisten.

13. Kaca obyek, kaca penutup dan pipet direndam dalam larutan yang berisi

desinfektan, lalu dicuci dengan air dan sabun. Labu ukur, erlenmeyer dan beker

glass dbasuh dengan desinfektan, lalu dicuci dengan air dan sabun. Tabung

reaksi dan cawan petri diletakkan dalam panci berisi air, rebus sampai mendidih.

lalu cuci dengan air dan sabun.

1 4. Bersihkan lensa-lensa mikroskop menggunakan kapas dan xylene.

15. Rapihkan kembali laboratorium tempat anda bekerja.

BENTUK LAPORAN

A. PENGAMATAN MIKROSKOPIS

Semua pengamatan mikroskopis harus digambarkan dan diwarnai sesuai

dengan pengamatan di bawah mikroskop, pada buku gambar khusus. Setiap halaman

diberi garis pinggir lalu dibagi menjadi 2 bagian. Setiap bagian diperuntukkan untuk 1

pengamatan. Pada bagian atas, dituliskan :

- Nomer dan nama kegiatan

- Tanggal pengamatan

- Zat kimia (yang dipakai)

- Sampel (mikroorganisme)

Hasil pengamatan digambarkan dalam sutui zona lingkaran dan diberi

keterangan yang diperlukan. Buku gambar dikumpulkan dan diperiksa pada tengah

semester.

B. LAPORAN

Kegiatan selain pengamatan mikroskopis, diwajibkan untuk diserahkan dalam

bentuk laporan praktikum. Laporan dibuat oleh masing-masing kelompok praktikan

dengan format sebagai berikut:

1. Cover laporan, terdiri dari nomor dan nama kegiatan, fnama dan nomor induk

mahasiswa serta nama laboratorium tempat prakikum berlangsung.

2. Format dalam, terdiri dari :

- tujuan

- teori singkat

- alat dan bahan

- prosedur kerja

- data pengamatan dan hasil perhitunan

- pembahasan

- kesimpulan dan saran

- daftar pustaka

- Laporan dapat ditik maupun ditulis tangan (rapih).

- Laporan harus diserahkan 1 minggu setelah praktikum tersebut berlangsung.

- Perpindahan jam/hari praktikum hanya boleh dilakukan atas seizin Kepala

Laboratorium Mikrobiologi Dasar.

- Mahasiswa yang mengikuti praktikum kurang dari 80% atau tidak menyerahkan

hasil pengamatan mikroskopis dan laporan, tidak diperkenankan mengikuti

ujian praktikum.

Berbagai prosedur umum kerja dalam mikrobiologi yang membutuhkan teknik

Gambar 1

Saran saran Kerja Aseptis :

1. Sebelum membuka ruangan atau bagian steril di dalam

tabung/cawan/Erlenmeyer sebaiknya bagian mulut (bagian yang

memungkinkan kontaminan masuk) dibakar/dilewatkan api terlebih dahulu.

2. Pinset, batang pengaduk dll dapat disemprot dengan alcohol 70% terlebih

dahulu lalu dibakar.

3. Ujung jarum inoculum yang sudah dipijarkan harus ditunggu dingin dahulu atau

dapat ditempelkan tutup cawan bagian dalam untuk mempercepat transper

panas yang terjadi.

4. Usahakan bagian alat yang diharapka dalam kondisi steril didekatkan ke

bagian api.

5. Jika kerja di Safety Cabinet tidak perlu memakai pembakar Bunsen tetapi jika

kerja di luar Safety Cabinet maka semakin banyak sumber api maka semakin

terjamin kondisi aseptisnya.

KEGIATAN I

MIKROSKOP MEDAN TERANG

TUJUAN

Memperkenalkan prinsip-prinsip penting Mikroskopi cahaya, bagian-bagian

mikroskop majemuk, penanganan dan pemeliharaan serta penggunaan mikroskop yang

baik.

TEORI SINGKAT

Mikroskop Medan Terang

Mikroskop Medan Terang (bright field microscope) adalah mikroskop dengan medan

rnikroskopis atau medan yang mengelilingi spesimen terlihat terang, sedangkan obyek

yang diamati tampak lebih gelap dari latar belakangnya. Hal ini disebabkan cahaya dari

suatu sumber masuk melalui sistem-sistem lensa tanpa mengalami perubahan, sehingga

terbentuk medan yang terang. Mikroskop yang dipakai saat ini umumnya menggunakan

dua sistem lensa terpish, yaitu lensa obyektif dan lensa okular, maka mikroskop ini

disebut pula sebagai mikroskop majemuk.

Pada umumnya, mikroskop ini menghasilkan perbesaran maksimum sekitar 1000X.

Ketajaman bayangan pada perbesaran maksimum tergantung pada pengaturan

diafragma, kondensor, minyak emersi dan faktor-faktor lain

Gambar l. Mikroskop Majemuk

1

Lensa dan Perbesaran

Lensa mikroskop terdapat pada kondensor, obyektif dan okular. Kondensor

merupakan lensa pengumpul cahaya di bawah pentas yang memusatkan cahaya pada

spesimen. Lensa obyektif merupakan lensa yang terletak dekat dengan spesirnen dan

lensa okular merupakan lensa pada ujung atas mikroskop, dekat dengan mata.

Lensa pada kondensor memusatkan kerucut cahaya pada medan specimen.

Sebagian berkas cahaya daam kerucut cahaya akan langsung menembus lensa obyektif,

untuk mcmbentuk cahaya latar belakang atau medan terang. Berkas cahaya yang

mengenai obyek akan difokuskan lensa obyektif sehingga membentuk bayangan nyata.

Bayangan tersebut diperbesar oleh lensa okular untuk menghasilkan bayangan maya.

Kebanyakan mikroskop laboratorium dilengkapi tiga lensa obyektif, yaitu lensa

16 mm (berkekuatan rendah 10 X), lensa 4 mm (berkekuatan tinggi 40-45 X) dan lensa

celup minyak 1,8 mm (97-100 X). Lensa-lensa tersebut terletak pada suatu bidang yang

dapat diputar. Angka 16, 4 dan 1,8 menyatakan jarak fokus (focal length), sedang angka

10 X, 45 X dan 100 X nenyatakan daya perbesaran. Perbesaran total diperoleh dengan

mengalikan perbesaran obyeklif dengan perbesaran okular.

Ujung lensa obyektif celup minyak sangat kecil sehingga hanya sedikit cahaya

yang masuk, maka diafragma iris kondensor harus dibuka penuh dan penghematan

cahaya dilakukan dengan bantuan minyak emersi.

Resolusi dan Daya Pisah

Bila lensa difokuskan pada suatu obyek, maka dua titik terpisah pada benda

tersebut akan membentuk dua bayangan. Tetapi kedua bayangan tersebut dapat terlihat

sebagai satu titik akibat adanya difraksi. Resolusi adalah kemampuan lensa untuk

memisahkan kedua bayangan sebagai bagian-bagian yang terpisah. Difraksi

menyebabkan resolusi tidak mungkin sempurna.

Jarak terpendek yang masih mungkin untuk melihat dua bayangan sebagai

bagian-bagian terpisah disebut daya pisah lensa. Daya pisah ditentukan oleh panjang

gelombang cahaya dan tingkap numeris (numerical aperlure atau NA) sistem lensa

obyektif dan kondensor. Hubungan tersebut dinyatakan daam persamaan berikut :

Dari pers