Top Banner
BAB I PENDAHULUAN 1. Dasar Teori BAKTERI Bakteri, dari kata Latin bacterium (jamak, bacteria), adalah kelompok besar Prokariota, selain Archaea, yang berukuran sangat kecil serta memiliki peran besar dalam kehidupan di bumi. Mereka sangatlah kecil (mikroskopik) dan kebanyakan uniselular (bersel tunggal), dengan struktur sel yang relatif sederhana, yaitu tanpa nukleus/inti sel, kerangka sel, dan organel-organel lain seperti mitokondria dan kloroplas. Bakteri dianggap sebagai organisme paling melimpah di bumi. Bakteri tersebar dan menghuni hampir semua tempat (di tanah, air, udara, atau dalam simbiosis dengan organisme lain). Banyak patogen merupakan bakteri. Kebanyakan dari mereka kecil, biasanya hanya berukuran 0,5-5 μm, meski ada jenis dapat menjangkau 0,3 mm dalam diameter (Thiomargarita). Mereka umumnya memiliki dinding sel, seperti sel tumbuhan dan jamur, tetapi dengan bahan pembentuk sangat berbeda (peptidoglikan). Banyak bakteri yang bergerak menggunakan flagela, yang berbeda dalam strukturnya dari flagela kelompok lain. Tidak semua bakteri dapat membentuk spora. Jenis-jenis bakteri tertentu, terutama yang tergolong kedalam genus Bacillus dan Clostridium, membentuk suatu struktur di dalam sel pada tempat-tempat yang khas, disebut endospora. Sifat dari 1
39

Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

Dec 05, 2014

Download

Documents

Welcome message from author
This document is posted to help you gain knowledge. Please leave a comment to let me know what you think about it! Share it to your friends and learn new things together.
Transcript
Page 1: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

BAB I

PENDAHULUAN

1. Dasar Teori

BAKTERI

Bakteri, dari kata Latin bacterium (jamak, bacteria), adalah kelompok besar Prokariota,

selain Archaea, yang berukuran sangat kecil serta memiliki peran besar dalam kehidupan di

bumi. Mereka sangatlah kecil (mikroskopik) dan kebanyakan uniselular (bersel tunggal),

dengan struktur sel yang relatif sederhana, yaitu tanpa nukleus/inti sel, kerangka sel, dan

organel-organel lain seperti mitokondria dan kloroplas.

Bakteri dianggap sebagai organisme paling melimpah di bumi. Bakteri tersebar dan

menghuni hampir semua tempat (di tanah, air, udara, atau dalam simbiosis dengan organisme

lain). Banyak patogen merupakan bakteri. Kebanyakan dari mereka kecil, biasanya hanya

berukuran 0,5-5 μm, meski ada jenis dapat menjangkau 0,3 mm dalam diameter

(Thiomargarita). Mereka umumnya memiliki dinding sel, seperti sel tumbuhan dan jamur,

tetapi dengan bahan pembentuk sangat berbeda (peptidoglikan). Banyak bakteri yang

bergerak menggunakan flagela, yang berbeda dalam strukturnya dari flagela kelompok lain.

Tidak semua bakteri dapat membentuk spora. Jenis-jenis bakteri tertentu, terutama yang

tergolong kedalam genus Bacillus dan Clostridium, membentuk suatu struktur di dalam sel

pada tempat-tempat yang khas, disebut endospora. Sifat dari endospora adalah tahan terhadap

pemanasan serta dalam keadaan kekurangan nutrient, tahan terhadap panas dan unsur fisik

lainnya dari pada bakteri biasanya, yaitu bakteri dalam bentuk vegetatif hal ini disebabkan

karena dinding spora sedikit banyak impermeabel, sedang banyaknya asam ribonukleat di

dalam protoplasma dapat menawar pengaruh buruk dari sinar, lebih – lebih dari sinar ultra

ungu. Berhubung spora itu mengandung sangat sedikit air, maka keadaan ini menyebabkan

spora tidak mudah megalami perubahn temperatur. Endospora dapat tetap tinggal disalah satu

ujung atau di tengah-tengah sel. Sel dapat pecah karena perkembangan endospora. Pecahan

itu kemudian luluh menjadi satu dengan medium.

Jika keadaan luar menguntungkan, maka spora dapat tumbuh lagi menjadi bakteri biasa.

Mula – mula air meresap ke dalam spora, kemudian spora mengembang dan kulit spora

menjadi retak karenanya. Keretakan ini dapat terjadi pada salah ssatu ujung, tetapi dapat juga

1

Page 2: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

pada tengah-tengah spora, hal ini merupakan salah satu ciri khas pada Bacillus. Jika kulit

spora pecah di tengah-tengah, maka masing-masing pecahan akan merupakan suatu tutup

pada kedua ujung bakteri.

Pada bakteri, spora berfungsi dalam mempertahankan diri terhadap pengaruh buruk dari

luar. Spora bakteri mempunyai fungsi yang sama seperti kista amoeba karena bakteri dalam

bentuk spora dan amoeba dalam bentuk kista berada dalam fase yang sama. Dimana kedua

mikroorganisme ini berubah bentuk dalam usaha melindungi diri dari keadaan tidak

menguntungkan.

Bentuk spora ada yang bulat, ada pula yang bulat panjang dan ada pula yang lebih besar

dari pada diameter sel induk. Hal ini bergantung kepada spesiesnya. Endospora ada yang

lebih kecil dan ada pula yang besar dari pada diameter sel induk. Sel yang mengandung

endospora itu kemudian disebut sporangium atau kotak spora. Biasanya satu sporangium

berisi satu endospora, akan tetapi ada kalanya satu sporangium berisi dua spora, hal ini

disebabkan karena pembelahan sel yang lambat.

Pembentukkan spora disebut dengan sporulasi, pada umumnya sporulasi mudah terjadi,

apabila keadaan medium memburuk, zat-zat yang timbul sebagai tempat pertukaran zat

menumpuk dan faktor merugikan. Beberapa spesies bakteri dapat kehilangan kemampuan

nya untuk dapat membentuk spora.

Adanya spora dapat diketahui dengan pengamatan secara morfologi dan secara fisiologi.

Bentuk spora dapat dilihat dengan mikroskop biasa, apalagi kalau spora itu diwarnai. Ada

dua metode umum yang dipakai, yaitu metode scaeffer-fulton dan metode dorner. Metode

dorner menggunakan nigrosin dan menghasilkan spora berwarna merah dan sporangium

yang tak berwarna.

Pewarnaan spora memerlukan pemanasan lebih dulu. Spora yang tidak meresap zat warna

nampak berlainan dari pada sporangiumnya. Jika spora tidak diwarnai, ia nampak sebagai

benda yang agak suram di samping protoplasma yang tembus cahaya. Biasanya pewarnaan

spora dipakai untuk menyebut alat pembiakkan yang terdapat pada jamur, ganggang, lumut,

paku – pakuan.

2

Page 3: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

Istilah spora pada bakteri mempunyai arti yang lain. Spora bakteri yang sedang dalam

usaha mengamankan diri terdapat pengaruh buruk dari luar. Spora bakteri mempunyai

fungsi yang sama seperti kista amoeba, sebab bakteri dalam bentuk spora dan amoeba dalam

bentuk kista merupakan suatu fase, dimana kedua mikroorganisme itu berubah bentuk untuk

melindungi diri terhadap faktor – faktor luar yang tidak menguntungkan. Setelah keadaan

luar baik lagi bagi mereka, maka pecahlah bungkus spora atau dinding kista, dan tumbuhlah

bakteri atau amoeba sebagaimana biasanya.

Menurut knaysi terjadinya spora atau sporulasi itu dapat dibagi atas 4 tahap :

1) Tahap permulaan, di mana koloni menunjukkan pertumbuhan yang sangat lambat.

2) Selama beberapa jam kelihatan adanya bahan – bahan lipo protein yang mengumpul

kesalah satu ujung sel, sehingga ujung itu sangat padat.

3) Maka timbullah bungkus yang menyelubungi calon spora. Selubung terdiri atas 2 lapis,

yaitu kulit luar (eksin) dan kulit dalm (intin). Pada beberapa spesies inti itu menjadi

dinding sel, apabila spora melanjutkan pertumbuhannya menjadi bakteri biasa. Dinding

spora melanjutkan pertumbuhannya menjadi bakteri biasa. Dinding spora itu

impermeabel bagi zat – zat yang dapat mengganggu kehidupan bakteri.

4) Pada tahap yang terakhir maka spora tampak berubah bentuk dan berubah volume.

Beberapa macam cara pengecatan spora adalah sebagai berikut :

a. Cara pengecatan spora menurut klein

Biakan bakteri berspora yang berumur 48-72 jam disuspensikan dalam larutan garam

fisiologis kedalam suspensi tersebut ditambahkan larutan karbolfuksin. Kemudian

dipanaskan dalam penangas air pada suhu 80o C selama 10 menit dari suspensi yang

berwarna ini, dibuat film tipis diatas kaca objek. Setelah kering difiksasi, selanjutnya

preparat dicelupkan beberapa detik dalam asam sulfat 1%, disusul pencucian dengan air

akhirnya dicat dengan larutan metilen biru selama 3 menit, dicuci dengan air dan

dikeringkan. Hasil pengecatan adalah spora berwarna merah dan bakteri berwarna biru.

3

Page 4: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

b. Pewarnaan spora dengan cara lain

Pengecatan Ziehl-Neelsen dengan sediklit modifikasi. Dalam hal ini dekolorisasi hanya

dilakukan dengan alkohol. Hasil pengecatannya adalah spora berwarna merah dan sel bakteri

berwarna biru. Film preparat disiram dengan larutan hijau malakhit jenuh dan ditunggu

selama 10 menit sambil sewaktu-waktu dipanaskan, kemudian dicuci dengan air selama 10

detik. Pengecatan dilanjutkan dengan larutan safranin dalam air (0,25%) selama 15 detik.

Akhirnya dicuci dengan air dan dikeringkan. Hasil pengecatan adalah spora berwana hijau

dan sel berwarna merah

1. Struktur Bakteri

Struktur Sel Bakteri

a. Dinding Sel

Fungsi dinding sel adalah

Memberi bentuk pada sel dan melindungi bakteri dari pengaruh buruk yang datang

dari luar sel (patogen).

Sebagai lapisan penyokong dan pelindung struktur dalam.

Secara medis, fungsi dinding sel sebagai tempat aksi antibiotik serta pembeda tipe

bakteri.

Komposisi kimiawi dari dinding sel yaitu peptidoglikan. Polimer yang amat besar ini

terdiri dari tiga macam bahan pembangun, yaitu N-acetilglukosamin, asamN-acetilmuramik dan

suatu peptide yang terdiri dari 4 asam amino (L-alanin, D-alanin, asam D-glutamat, dan Lisin

4

Page 5: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

atau asam diaminopimelat). Dinding sel yang utuh juga mengandung kompenen-kompenen

kimiawi yang lain, seperti asam tekoat, protein, polisakarida, lipoprotein, dan lipopolisakrida

yang terikat pada peptydoglikan. Peptydoglikan bersama-sama dengan kedua kompenen lain

dinding sel, hanya dijumpai pada prokariota. Namun, susunan kimiawi secara struktur

peptydoglikan bervariasi dari suatu spesies bakteri ke spesies bakteri yang lain. Penemuan

penting lain yang diperoleh selama berlangsungnya identifikasi komposisi kimiawi dinding sel

bakteri ialah bahwa beberapa dari asam-asam amino di dalam peptide dan peptidoglikan terdapat

dalam konfigurasi D. Ini berlawanan dengan penampilannya di dalam protein, yaitu terdapat

dalam konfigurasi L.

Bakteri dapat digolongkan menjadi dua kelompok berdasarkan pada perbedaan struktur

dinding sel nya, yaitu Gram positif dan Gram negatif. Bakteri Gram positif memiliki dinding sel

yang tersusun dari lapisan peptidoglikan yang tebal dan asam teikoat. Sementara bakteri Gram

negatif memiliki lapisan luar dari lipopolisakarida yang terdiri dari membran dan lapisan

peptidoglikan yang tipis dan terletak pada periplasma (di antara lapisan luar dan membran

sitoplasma).

b. Protoplasma (Cytoplasma)

Merupakan zat hidup dari sel. Terdapat dalam lingkungan dinding sel. Terutama terdiri

dari protein.

c. Membran Cytoplasma

Merupakan bagian terluar dari cytoplasma yang melekat pada dinding sel. Perkiraan

ketebalannya yang didasarkan pada mikrograf electron irisan-irisan tipis ialah sekitar

7,5 nm. Membran sitoplasma juga menyediakan peralatan biokimiawi untuk

memindahkan ion-ion mineral, gula, asam-asam amino, elektron serta metabolit-

metabolit lain melintasi membran. Substansi-substansi dalam larutan ini, atau solute

lewat melintasi membran dengan cara difusi pasif atau angkatan aktif. Membran

sitoplasma dengan cara melipat kearah dalam atau invaginasi ke dalam sitoplasma

menghasilkan struktur yang disebut mesosom. Mesosom selalu sinambung dengan

membran sitoplasma.

5

Page 6: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

d. Nukleus (Inti)

Di dalamnya terdapat pembawa sifat (chromosome)

e. Kapsul

Yaitu suatu selaput lendir yang membungkus seluruh permukaan bakteri dan

merupakan bagian dari sel bakteri. Kapsul ini bersifat antigen dan merupakan

pelindung bakteri. Bila bakteri itu kehilangan kapsulnya sama sekali, maka ia dapat

kehilangan virulensinya dan dengan demikian kehilangan kemampuannya

menyebabkan infeksi. Bakteri-bakteri berkapsul juga menyebabkan adanya gangguan

seperti lendir dalam beberapa proses industri. Penumpukan lendir dalam peralatan

pabrik dapat menyumbat filter membentuk lapisan yang tidak dikehendaki pada pipa-

pipa atau peralatan atau mempengaruhi kualitas produk akhirnya.

f.Flagel

Salah satu sifat bakteri adalah dapat bergerak. Alat gerak bakteri adalah flagel (bulu

cambuk). Flagel mempunyai ukuran panjang : 1 – 70 μ, tebal : 12–15 mili μ.

Flagelum menyebabkan motilitas (pergerakan) pada sel bakteri. Flagelum dibuat dari

subunit-subunit protein. Protein ini disebut flagelin. Tidak semua bakteri mempunyai

flagellum, banyak spesies Basillus dan Spirillum yang memilikinya, tapi flagellum

jarang dijumpai pada kokus.

Tabel fungsi struktur Permukaan Sel Bakteri

6

Page 7: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

Ciri

2. Ukuran Bakteri

Bakteri merupakan organisme mikroskopis rata-rata berdiameter 1,25 mikrometer (μm).

Ukuran bakteri adalah mikroskopis artinya dapat dilihat dengan menggunakan mikroskop.

3. Bentuk Bakteri

Berdasarkan bentuknya, bakteri dibagi menjadi tiga golongan besar, yaitu:

Kokus (Coccus) dalah bakteri yang berbentuk bulat seperti bola, dan mempunyai

beberapa variasi sebagai berikut:

Mikrococcus. Jika kecil dan tunggal. Misal Monococcus gonorhoe.

Diplococcus. Jka bergandanya dua-dua. Misal Diplococcus pneumoniae penyebab

penyakit pneumonia (radang, paru-paru).

7

STRUKTURFUNGSI KOMPOSISI KIMIAWI

Flagela Lokomosi (alat gerak) Protein

Kapsul dan bahan ekstra

selular

Penutup lindung pelekatan sel

makanan cadanganPolisakarida, polipeptida

Pili Tabung konjugasi pelekatan sel Protein

Dinding sel Penutup lindung permeabilitasPeptidoglikan, asam teikoat,

polisakarida,l ipid dan protein

Membran sittoplasma dan

mesosom

Penutup semipermeabel

mekanisme traspor pembelahan

sel sintesis makromolekul

Lipid, protein

Page 8: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

Tetracoccus. Jika bergandengan empat dan membentuk bujursangkar

Sarcina. Jika bergerombol membentuk kubus. Misal Sarcina luten.

Staphylococcus. Jika bergerombol, yaitu bakteri berbentuk bola yang berkoloni

seperti buah anggur, misal Staphlococcus aureus, penyebab penyakit radang paru-

paru.

Streptococcus, jika bergandengan membentuk rantai. Misal Streptococcus lactis,

Streptococcus pyogenes penyebab sakit tenggorokan dan Streptococcus thermophilis

untuk pembuatan yoghurt (susu asam).

Basil (Bacillus) adalah kelompok bakteri yang berbentuk batang atau silinder, dan

mempunyai variasi sebagai berikut:

Basil tunggal : bakteri yang hanya berbentuk satu batang tunggal. Contoh: Escherichia

coli bakteri yang terdapat pada usus dan Lactobacillus.

Diplobacillus. Jika bergandengan dua-dua.

Streptobacillus. Jika bergandengan membentuk rantai. Misal Bacillus anthracis

penyebab penyakit antrak.

Cocobacillus : batang yang sangat pendek menyerupai coccus

Spiril (Spirilum) atau bentuk spiral adalah bakteri yang berbentuk lengkung dan

mempunyai variasi sebagai berikut:

Vibrio, (bentuk koma), jika lengkung kurang dari setengah lingkaran, misal Vibrio

cholerae penyebab penyakit kolera.

Spiral, jika lengkung lebih dari setengah lingkaran atau spiral tidak sempurna.

Spiroseta : yaitu golongan bakteri berbentuk spiral yang dapat bergerak, misal:

Spirochaeta palida, penyebab penyakit sifilis.

8

Page 9: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

4. Alat Gerak Bakteri

Flagel atau cambuk getar merupakan bagian dari bakteri sebagai alat untuk

bergerak, flagel melekat pada membran luar di dinding sel. Ukuran flagel bakteri

sangat kecil, tebalnya 0,02 – 0,1 μ, dan panjangnya melebihi panjang sel bakteri.

Berdasarkan tempat dan jumlah flagel yang dimiliki, bakteri dibagi menjadi lima

golongan, yaitu:

Atrik, tidak mempunyai flagel.

Monotrik, mempunyai satu flagel pada salah satu ujungnya.

Lofotrik, mempunyai sejumlah flagel pada salah satu ujungnya.

Amfitrik, mempunyai satu flagel pada kedua ujungnya.

Peritrik, mempunyai flagel pada seluruh permukaan tubuhnya.

A:Monotrik

B : Lofotrik

C : Amfitrik

D : Peritrik

9

Page 10: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

5. Pengaruh Lingkungan Terhadap Bakteri

Kondisi lingkungan yang mendukung dapat memicu pertumbuhan dan reproduksi

bakteri. Faktor-faktor lingkungan yang berpengaruh terhadap pertumbuhan dan

reproduksi bakteri adalah suhu, kelembapan, dan cahaya.

a) Suhu

Berdasarkan kisaran suhu aktivitasnya, bakteri dibagi menjadi 3 golongan:

Bakteri psikrofil, yaitu bakteri yang hidup pada daerah suhu antara 0°– 30°

C, dengan suhu optimum 15° C.

Bakteri mesofil, yaitu bakteri yang hidup di daerah suhu antara 15° – 55° C,

dengan suhu optimum 25° – 40° C.

Bakteri termofil, yaitu bakteri yang dapat hidup di daerah suhu tinggi antara

40° – 75° C, dengan suhu optimum 50o - 65° C

b) Kelembaban udara

Pada umumnya bakteri memerlukan kelembaban udara yang cukup tinggi, kira-

kira 85%. Pengurangan kadar air dari protoplasma menyebabkan kegiatan

metabolisme terhenti, misalnya pada proses pembekuan dan pengeringan.

c) Cahaya

Cahaya sangat berpengaruh pada proses pertumbuhan bakteri. Umumnya

cahaya merusak sel mikroorganisme yang tidak berklorofil. Sinar ultraviolet

dapat menyebabkan terjadinya ionisasi komponen sel yang berakibat

menghambat pertumbuhan atau menyebabkan kematian. Pengaruh cahaya

terhadap bakteri dapat digunakan sebagai dasar sterilisasi atau pengawetan

bahan makanan.

Jika keadaan lingkungan tidak menguntungkan seperti suhu tinggi,

kekeringan atau zat-zat kimia tertentu, beberapa spesies dari Bacillus yang aerob

dan beberapa spesies dari Clostridium yang anaerob dapat mempertahankan diri

dengan spora. Spora tersebut dibentuk dalam sel yang disebut endospora.

Endospora dibentuk oleh penggumpalan protoplasma yang sedikit sekali

10

Page 11: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

mengandung air. Oleh karena itu endospora lebih tahan terhadap keadaan

lingkungan yang tidak menguntungkan dibandingkan dengan bakteri aktif. Apabila

keadaan lingkungan membaik kembali, endospora dapat tumbuh menjadi satu sel

bakteri biasa. Letak endospora di tengah-tengah sel bakteri atau pada salah satu

ujungnya.

6. Peranan Bakteri

a. Bakteri Menguntungkan

Bakteri Pengurai

Bakteri saprofit menguraikan tumbuhan atau hewan yang mati, serta sisa-sisa

atau kotoran organisme. Bakteri tersebut menguraikan protein, karbohidrat

dan senyawa organik lain menjadi CO2, gas amoniak, dan senyawa-senyawa

lain yang lebih sederhana. Oleh karena itu keberadaan bakteri ini sangat

berperan dalam mineralisasi di alam dan dengan cara ini bakteri

membersihkan dunia dari sampah-sampah organik.

Bakteri Nitrifikasi

Bakteri nitrifikasi adalah bakteri-bakteri tertentu yang mampu menyusun

senyawa nitrat dari amoniak yang berlangsung secara aerob di dalam tanah.

Bakteri Nitrogen

Bakteri nitrogen adalah bakteri yang mampu mengikat nitrogen bebas dari

udara dan mengubahnya menjadi suatu senyawa yang dapat diserap oleh

tumbuhan. Karena kemampuannya mengikat nitrogen di udara, bakteri-bakteri

tersebut berpengaruh terhadap nilai ekonomi tanah pertanian. Kelompok

bakteri ini ada yang hidup bebas maupun simbiosis.

Bakteri Usus

Bakteri Eschereria coli hidup di kolon (usus besar) manusia, berfungsi

membantu membusukkan sisa pencernaan juga menghasilkan vitamin B12,

dan vitamin K yang penting dalam proses pembekuan darah.

Bakteri Fermentasi

Beberapa makanan hasil fermentasi :

No. Nama produk atau Bahan Bakteri yang berperan

11

Page 12: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

makanan baku

1. Yoghurt susuLactobacillus bulgaricus dan

Streptococcus thermophilus

2. Mentega susu Streptococcus lactis

4.Asinan buah-

buahan

buah-

buahanLactobacillus sp.

Bakteri Penghasil Antibiotik

Antibiotik merupakan zat yang dihasilkan oleh mikroorganisme dan

mempunyai daya hambat terhadap kegiatan mikroorganisme lain. Beberapa

bakteri yang menghasilkan antibiotik adalah:

Bacillus brevis, menghasilkan terotrisin

Bacillus subtilis, menghasilkan basitrasin

Bacillus polymyxa, menghasilkan polimixin

b. Bakteri Merugikan

1. Bakteri Perusak Makanan

Beberapa spesies pengurai tumbuh di dalam makanan. Mereka mengubah

makanan dan mengeluarkan hasil metabolisme yang berupa toksin.

2. Bakteri Denitrifikasi

Jika oksigen dalam tanah kurang maka akan berlangsung denitrifikasi, yaitu

nitrat direduksi sehingga terbentuk nitrit dan akhirnya menjadi amoniak yang

tidak dapat dimanfaatkan oleh tumbuhan.

3. Bakteri Patogen

Merupakan kelompok bakteri parasit yang menimbulkan penyakit pada

manusia, hewan dan tumbuhan. Contoh Mycobacterium tuberculosis

penyebab penyakit TBC paru-paru.

Pewarnaan ZN (Ziehl-Neelsen) atau Pewarnaan Tahan Asam

Beberapa bakteri sulit diwarnai dengan pewarnaan gram. Zat pewarna ZN disebut juga

zat pewarna tahan asam. Dasarnya dari sebagian organisme menahan fuksin karbol walaupun

12

Page 13: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

dilunturkan dengan asam. Organisme seperti ini disebut kuman tahan asam. Meskipun demikian,

sifat tahan asam ini disebabkan oleh adanya asam mikolat. Pewarnaan ini digunakan untuk

mengidentifikasi organisme bermarga Mycobacterium dan Spirochaeta. Contoh kuman tahan

asam ialah Mycobacterium, spora kuman, aksospora jamur-jamur tertentu, rangka luar serangga,

benda inklusi pada paru penderita pneumonia lemak, dan pigmen lipid pada hati tikus.

Suatu Mycobacteria dikatakan tahan asam karena dapat mempertahankan zat pewarna

merah (karbolfuchsin) meskipun dicuci dengan alcohol. Perlakuan ini menghilangkan zat

pewarna dari organisme lain dalam olesan. Suatu perkecualian pada bakteri pathogen yaitu

marga Nocardia. Bakteri ini tidak tahan asam seperti Mycobacteria. Dengan pencucian yang

terus-menerus menyebabkan Nocardia kehilangan zat warna.

Mycobacterium memiliki lapisan lilin di sebelah luar dinding sel sehingga zat warna tidak

dapat masuk ke dalam. Mycobacterium memiliki kandungan lipida yang tinggi dan mempunyai

lapisan lilin di luar sel yang bersifat impermeable. Supaya zat warna dapat menembus ke dalam

sel diperlukan pemanasan dan penambahan bahan kimia khusus. Untuk membantu perasukan zat

warna, ditambahkan karbolfuchsin yang mengandung fenol 5%.

Jika warna telah masuk ke dalam sel maka Mycobacterium akan tetap berwarna merah

meski ditambahkan asam alcohol sebagai pemucat. Larutan pemucat dalam pewarnaan ZN lebih

kuat karena mengandung HCl 3%. Lamanya pemucatan tidak akan mempengaruhi reaksi

pewarnaan ZN.

Bakteri-bakteri yang sifat dinding selnya tahan asam ZN (+) akan tetap mengikat

pewarna pertama/merah setelah pelunturan, sebaliknya bakteri yang tidak tahan asam ZN (-)

akan melepaskan pewarna pertama/merah setelah pelunturan dan dengan pemberian counterstain

(pewarna setelah proses pelunturan) akan mengikat warna counterstain/ungu.

Langkah-langkah pewarnaan ZN atau tahan asam adalah sebagai berikut :

Film bakteri pada kaca obyek yang telah difiksasi, disiram dengan karnolfuksin, kemudian

dipanaskan sampai keluar uap (tidak sampai mendidih). Pemanasan diulang beberapa kali

agar bahan cat tetap hangat , kemudian didiamkan selama lima menit.

Dekolorisasi dilakukan dengan asam-alkohol dalam waktu yang singkat, kemudian cepat cuci

dengan air.

13

Page 14: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

Pewarnaan dengan cat kontras dilakukan dengan metilenbiru dalam larutan KOH 1/1000.

Setelah dicuci kembali dengan air preparat dikeringkan di udara. Hasil pewarnaan adalah :

Mycobacterium berwarna merah dan bakteri lainnya berwarna biru.

Pewarnaan Spora

Jenis-jenis bakteri tertentu, terutama yang digolongkan ke dalam genus Bacillus dan

Clostridium, membentuk struktur di dalam sel pada tempat-tempat yang khas, disebut

Endospora. Endospora dapat bertahan hidup dalam keadaan kekurangan nutrient, tahan terhadap

panas dan unsur-unsur fisik lainnya seperti pembekuan, kekeringan, radiasi sinar ultraviolet serta

terhadap bahan-bahan kimia yang dapat menghancurkan bakteri yang tidak dapat membentuk

spora. Ketahanan tersebut disebabkan oleh adanya selubung spora yang tebal dan keras.

Endospora merupakan bentuk kehidupan yang paling resisten karena organism yang

bersangkutan dapat bertahan dalam debu dan tanah secara bertahun-tahun. Sifat endospora yang

demikian menyebabkan dibutuhkannya perlakuan yang keras untuk mewarnainya. Prosedur

pewarnaan gram misalnya, tidak dapat mewarnainya. Hanya bila diberikan perlakuan panas yang

cukup, pewarna yang sesuai dapat menembus endospora. Tetapi sekali pewarna tersebut

memasuki endospora, sulit dihilangkan. Ada dua metode yang umum dipakai yaitu : metode

Schaeffer-Fulton (SF) dan metode Dorner. Pada metode Schaeffer-Fulton menggunakan larutan

malachite-green (SF I) dan fuksin (SF II) akan menghasilkan spora yang berwarna hijau. Metode

Dorner menggunakan nigrosin dan menghasilkan spora yang berwarna merah dan sporangium

yang tidak berwarna.

Beberapa macam cara pewarnaan spora adalah sebagai berikut :

a. Cara pewarnaan Spora menurut Klein

1. Biakan bakteri spora yang berumur 48-72 jam disuspensi dalam larutan garam fisiologis

2. Ke dalam suspensi tersebut ditambahkan larutan karbolfuksin, kemudian dipanaskan dalam

penangas air pada suhu 80o C selama 10 menit.

3. Dari suspensi yang berwarna ini dibuat film yang tipis di atas kaca objek, setelah kering

difiksasi.

4. Selanjutnya preparat dicelupkan beberapa detik dalam asam sulfat 1%, disusul dengan

pencucian dengan air

14

Page 15: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

5. Akhirnya diwarna dengan larutan metilenbiru selama 3 menit, dicuci dengan air dan

dikeringkan.

b. Pewarnaan Spora dengan Cara Lain

1. Pewarnaan Ziehl-Neelsen dengan sedikit modifikasi. Dalam hal ini dekolorisasi hanya

dilakukan dengan alkohol. Hasil pewarnaannya adalah spora berwarna merah dan sel

bakteri berwarna biru.

2. Film preparat disiram dengan larutan hijau, malakhit jenuh (kira-kira 7,6%) dan ditunggu

selama 10 menit sambil sewaktu-waktu dipanaskan, kemudian dicuci dengan air selama 10

detik. Pewarnaan dilanjutkan dengan larutan safranin dalam air (0,25%) selama 15 detik.

Akhirnya dicuci dengan air dan keringkan. Hasil pewarnaan adalah spora berwarna hijau

dan sel berwarna merah.

Hal-hal yang perlu diperhatikan dalam mempelajari spora dari pewarnaan adalah sebagai

berikut :

a. Letak spora dalam sel kemungkinannya adalah sebagai terminal, subterminal, atau sentral

b. Bentuk spora bulat atau lonjong

c. Adanya spora dapat mengubah bentuk sel. Dalam hal letak spora terminal, bila terdapat spora

yang mengubah bentuk bakteri, dan spora menonjol keluar, maka bentuknya seperti pemukul

tambur (Clostridium tetani). Bila letaknya sentral atau subterminal, dan diameter spora lebih

besar dari diameter sel bakteri, maka bentuknya seperti kumparan.

PREPARAT OLESAN UNTUK PEWARNAAN

Sebelum dilakukan pewarnaan, bakteri disuspensikan dalam setets air pada kaca preparat

yang bersih, kemudian disebarkan hingga membentuk lapisan yang tipis. Olesan dibiarkan kering

di udara dan organismenya difiksasi pada kaca preparat dengan cara pemanasan hati-hati atau

secaraka kimiawi. Preparat ini disebut sebagai olesan yang telah difiksasi dan siap diwarnai.

Olesan yang baik tidak mengandung terlalu banyak sel bakteri dalam kondisi mengumpul,

tetapi harus memiliki jumlah sel yang cukup dan menyebar untuk memungkinkan pengamatan

yang tepat. Kaca preparat harus bebas lemak dengan cara dicuci bersih dengan detergen dibilas

dengan air dan dikeringkan dengan tisue atau dilewatkan di atas api. Jarum ose harus dilewatkan

api sebelum dan sesudah mengambil biakan bakteri.

15

Page 16: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

BAB II

METODE KERJA

TUJUAN PRAKTIKUM

Pewarnaan ZN (Ziehl-Neelsen) atau Pewarnaan Tahan Asam

Melakukan pewarnaan ZN pada sel bakteri

Membedakan kelompok bakteri ZN (+) dan (-)

Pewarnaan Spora

Melakukan pewarnaan spora pada sel bakteri

Membedakan letak spora pada bakteri

1. Pembuatan Preparat Olesan Bakteri untuk Pewarnaan

a. Siapkan kaca obyek bebas lemak. Ambil 4-5 ose suspensi sel yang akan diamati

secara aseptis, kemudian dengan jarum ose sebarkan suspensi bakteri tersebut secara

merata dari tengah-tengah kaca obyek ke arah luas (posisi jarum ose horizontal). Bila

biakan berasal dari biakan padat atau bukan kultur cair maka suspensikan dulu sel-sel

bakteri ke dalam larutan NaCl 0.85 % selanjutnya lakukan cara di atas.

16

Page 17: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

b. Biarkan olesan bakteri kering di udara, jangan dikeringkan dengan pemanasan. Bila

perlu pengeringan cepat, lewatkan preparat di atas api spiritus pada ketinggian + 33

cm di atas api spiritus.

c. Lakukan fiksasi untuk melekatkan olesan bakteri pada kaca obyek, dengan cara

melewatkan olesan yang telah kering tersebut di atas api soiritus beberapa kali

(bagian yang ada olesan bakteri menghadap ke atas).

2. Pewarnaan ZN

a. Siapkan preparat olesan bakteri Staphylococcus aureus yang telah difiksasi

b. Tetesi dengan beberapa tetes larutan carbol-fuchsin (ZN I). Panaskan di atas api

spiritus hingga timbul uap . Sisihkan dari api hingga uap hilang. Kemudian panaskan

lagi hingga timbul uap lagi dan lakukan lagi seperti di atas sebanyak 2-3 kali (selama

4-5 menit). Jaga jangan sampai larutan pewarna mendidih atau mengering, tambahkan

lagi larutan ZN I bila pewarna mulai berkurang / mengering.

c. Dinginkan preparat. Bilas air, tetesi dengan larutan ZN II (larutan alkohol-HCl)

hingga tidak ada pewarna yang terlunturkan

d. Bilas secara hati-hati dengan air

e. Warnai dengan pewarna tandingan (ZN III) yaitu larutan biru metilen selama 30

detik

f. Bilas dengan air. Kemudian kering-udarakan atau dikeringkan dengan cara menyerap

kelebihan air dengan kertas saring atau tisue.

g. Amati di bawah mikroskop pada perbesaran 400x dan 1000x. Gambar bentuk sel dan

reaksi pewarnaan tahan asam yang anda amati pada perbesaran 1000x.

3. Pewarnaan Spora

a. Siapkan preparat olesan Bacillus subtilis yang telah difiksasi

b. Tetesi dengan beberapa tetes larutan Malachite-green (SF I). Panaskan di atas api

spiritus hingga timbul uap. Sisihkan dari api hingga uap hilang. Kemudian panaskan

lagi hingga timbul uap lagi dan lakukan lagi seperti di atas sebanyak 2-3 kali (selama

4-5 menit). Jaga jangan sampai larutan pewarna mendidih atau mongering,

tambahkan lagi larutan SF I selama pemanasan untuk mencegah pengeringan.

17

Page 18: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

c. Dinginkan preparat. Bilas dengan air hingga tidak ada pewarna yang terlunturkan.

d. Tetesi dengan larutan fuchsin basa selama 1 menit.

e. Bilas dengan air. Kemudian kering-udarakan atau dikeringkan dengan cara menyerap

kelebihan air dengan kertas saring atau tisue.

f. Amati di bawah mikroskop pada perbesaran 400x dan 1000x. gambar bentuk sel dan

reaksi pewarnaan than asam yang anda amati pada perbesaran 1000x.

g. Lakukan pengamatan juga pada preparat Escherichia coli yang telah disiapkan

petugas.

BAB IV

HASIL PENGAMATAN

Gambar Hasil pengamatan Mikroskopik Pewarnaan Zn

Gambar sel-sel Staphylococus aureus 1000X

Warna sel : Ungu

Sel termasuk ZN : Negatif

18

Page 19: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

Gambar Hasil pengamatan Mikroskopik Pewarnaan spora

Bacilus subtilis 1000 x

Bentuk sel vegetatif : Basil

Warna sel : merah

Warna spora : hijau

Letak spora : terminal, sentral, dan sub terminal

Escherichia coli

Bentuk sel vegetatif : Coco Basil

Warna sel : merah

Warna spora : -

Letak spora : -

19

Page 20: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

BAB V

PEMBAHASAN

PEWARNAAN ZN

Fungsi zat warna yang digunakan dalam pewarnaan ini:

1. ZN I sebagai pewarna dasar berupa larutan karbol-fuchsin

Jika setelah proses pewarnaan bakteri berwarna merah, maka bakteri tersebut termasuk

dalam golongan bakteri tahan asam. Carbol fuchsin merupakan fuchsin base yang dilarutkan

dalam suatu campuran (fenol -alkohol-air).

2. ZN II sebagai peluntur berupa Alkohol-HCl

Digunakan untuk menguji ketahanan dinding sel terhadap suasana asam. Pada bakteri tahan

asam dinding sel tidak luntur,warna sel merah. Sedangkan, pada bakteri tidak tahan asam

dinding sel menjadi rusak.

3. ZN III sebagai counterstain atau pewarna tandingan berupa metilen biru

Pada bakteri tahan asam warna sel tetap merah. Sedangkan, pada bakteri tidak tahan asam

warna dari metilen-blue terserap masuk dan warna sel menjadi biru/ungu.

Pewarnaan ZN berdasarkan pada kandungan lapisan lilin atau wax yang terdapat pada

dinding sel bakteri tertentu yang ditandai dengan warna merah jika hasil positif (bakteri ZN

positif). Contoh bakteri yang memberikan hasil positif adalah Mycobacterium dan Spirochaeta.

Mycobacterium mempunyai kandungan lipid yang tebal (50% asam mikolat) dan bersifat

20

Page 21: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

impermeabel. Lapisan lilin itu sangat tebal di daerah luar dinding sel sehingga pewarnaan tidak

dapat masuk ke dalam dinding sel. Oleh karena itu diperlukan pemanasan. Pemanasan akan

membantu penyerapan zat warna utama (karbol fuchsin) menembus dinding selnya melalui

pemberian larutan pemucat (alkohol-HCl), bakteri tahan asam tetap berwarna merah sedangkan

pada bakteri tidak tahan asam zat warna utama akan luntur sehingga pada penambahan warna

kedua (Methylen blue) bakteri akan menyerap zat warna tersebut (biru).

Pada percobaan yang digunakan adalah Staphylococcus aureus, bakteri ini memiliki lapisan

lilin yang rendah atau tidak ada pada dinding selnya sehingga memberikan hasil negatif (Bakteri

ZN negatif) yang ditandai dengan warna biru-ungu. Mekanismenya adalah sebagai berikut:

1. Setelah pewarnaan ZN I menembus dinding sel yang kandungan lilinnya rendah, maka saat

diberi peluntur ZN II warna merah akan keluar dari sel. Lalu dengan penambahan

counterstain, warna biru akan masuk sehingga tampak dalam mikroskop bakteri tersebut

berwarna biru (ZN negatif)

2. Pada bakteri ZN positif akan menunjukkan warna merah karena setelah pemberian ZN I,

bakteri masih mengikat warna ZN I walaupun setelah pelunturan karena mengandung lapisan

lilin pada dinding selnya sehingga waktu diberi pewarna tandingan tetap memberikan warna

merah.

PEWARNAAN SPORA

Spora bakteri berfungsi sebagai mekanisme pertahanan dari lingkungan yang ekstrim.

Bakteri yang dapat membentuk spora berasal dari bakteri Gram Positif, seperti dari genus

Bacillus, Clostridium.

Lokasi spora membantu identifikasi berbagai spesies bakteri. Spora tahan terhadap proses

pewarnaan biasa, tetapi beberapa pewarna basa dapat dipaksa masuk ke dalam spora dengan cara

pemanasan (pori-pori spora membesar sehingga zat warna dapat masuk). Sekali spora menyerap

zat warna maka spora tidak mudah di dekolorisasi dilunturkan warnanya). Sedangkan zat warna

dapat dengan mudah dicuci dari sel vegetatif. Karena itu, saat olesan dicuci dan diberi pewarna

tandingan dengan zat warna kedua, spora akan tetap mempertahankan pewarna pertama dan sel

vegetatif akan menunjukkan warna dari pewarna kedua.

Fungsi zat warna yang digunakan dalam pewarnaan ini adalah:

21

Page 22: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

1. SF I sebagai pewarna dasar berupa larutan malachite-green

2. SF II sebagai conterstain berupa larutan fuchsin basa.

Pewarnaan spora termasuk salah satu contoh pewarnaan selektif. Spora umumnya dihasilkan

oleh familia Bacillaceae. Sel bakteri akan membentuk satu spora dan dilepas ke lingkungannya

setelah lepas dari sel vegetatifnya. Spora umumnya tidak terdapat pada kultur muda dan menjadi

banyak pada kultur yang tua. Pembentukkan spora segera terjadi pada kondisi lingkungan yang

tidak menguntungkan. Spora sangat tahan panas, kekeringan, radiasi, desinfektan dan

pembekuan untuk jangka waktu yang lama. Hal ini karena dinding spora lebih bersifat

impermeabel dan spora mengandung sangat sedikit air, sehingga keadaan ini menyebabkan spora

tidak mudah mengalami perubahan temperatur. Spora bakteri berfungsi sebagai mekanisme

pertahanan dan kelangsungan hidup jenis-jenis bakteri tertentu.

Letak spora dalam sel:

1. Terminal, jika spora dibentuk di daerah ujung sel

2. Subterminal, jika spora dibentuk di daerah dekat ujung sel

3. Sentral, jika spora dibentuk di daerah tengah-tengah sel

Larutan SF I berisi Malachite green sebagai pewarna untuk spora. Sehingga pada tahap

pewarnaan ini dilakukan pemanasan supaya dapat menembus dinding spora. Larutan ini memberi

warna hijau. Endospora sukar menyerap zat warna, tetapi sekali diberi zat warna, warna tersebut

sulit dilunturkan. Dalam praktikum pewarnaan spora pada bakteri Bacillus subtilis setelah diberi

warna safarin I ( larutan melachite green ) dilakukan pemanasan 2-3 menit yang ditujukan untuk

membantu masuknya pewarna menembus kulit spora yang tebal, dengan adanya pemanasan pori-

pori membesar , spora meregang dan zat warna dapat masuk dengan mudah. Pewarna pertama

untuk spora belum tentu malachite green, bisa juga menggunakan pewarna lain, misal karbol

fuksin yang berwarna merah, tapi proses tetap diikuti dengan pemanasan. Pada pewarnaan

karbon fuksin, spora berwarna merah. Malachite green segera masuk ke dalam spora dan spora

yang telah terpisah dari sel vegetatif akhirnya terlihat berwarna hijau pada perbesaran dengan

mikroskop. Selanjutnya karena spora telah terpisah dari sel vegetatif dan berwarna oleh safranin

I, maka sel vegetatif terakhir terlihat berwarna merah karena warna yang terserap adalah warna

merah dari safranin II yang terakhir diberikan dan dibiarkan 1 menit, dibilas dan dikeringkan.

Pembilasan dengan air akan melunturkan warna Malachite green dari sel vegetatif. Air berfungsi

sebagai agen dekolorisasi sel.

22

Page 23: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

Larutan SF II berisi larutan fuchsin basa atau dapat juga digunakan larutan safranin. Larutan

ini digunakan untuk mewarnai sel vegetatif sehingga timbul warna merah, warna ini tidak

mempengaruhi warna hijau dari spora.

Spora tahan proses pewarnaan biasa, tetapi beberapa pewarnaan biasa dapat dipaksa masuk

ke dalam spora dengan cara pemanasan (melalui pori-pori spora zat warna dapat masuk). Sekali

spora menyerap zat warna maka spora tidak mudah didekolorisasi (penghilangan warna),

sedangkan zat warna dapat dengan mudah dicuci dari sel vegetatif. Karena itu saat olesan dicuci

dan diberi pewarna tandingan dengan zat warna kedua, spora akan tetap mempertahankan

pewarna pertama dan sel vegetatif akan menunjukkan pewarna dari pewarna kedua. Larutan

pewarna dari pewarna gram tidak akan mewarnai spora dan akibatnya spora akan tampak tak

berwarna (transparan) dalam sitoplasma sel-sel bakteri yang diwarnai. Berikut merupakan

prosedur pewarnaan endospora dengan metode Schaeffer-Fulton.

Pada percobaan ini kami menemukan spora di dalam sel vegetatif, tetapi sudah terlepas dari

sel vegetatif. Untuk Bacillus subtilis letak sporanya di central (di tengah-tengah) sel vegetatif,

tetapi letak spora yang paling dominan berada di ujung terminal. Bakteri Bacillus subtilis

memiliki sel vegetatif berwarna merah dan spora berwarna hijau, serta memiliki bentuk batang

yang lebih besar daripada E.coli.

Pada E.coli tidak ditemukan adanya spora karena E.coli tidak menghasilkan spora, sehingga

hanya ditemui sel vegetatif berwarna merah. Bakteri yang tidak memiliki spora bisa disebabkan

beberapa faktor, seperti faktor lingkungan. Dalam lingkungan yang menguntungkan, spora

bergerminasi kembali menjadi sel vegetatif. Bila lingkungan tidak menguntungkan sel vegetatif

berubah menjadi spora.

23

Page 24: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

BAB VI

KESIMPULAN

Pembuatan preparat untuk pewarnaan harus difikasi terlebih dulu sebelum ditetesi larutan

pewarna (gram). Sebelum difikasi preparat harus benar-benar kering karena jika tidak

struktur bakteri akan berubah akibat bakteri terebus bersama air steril.

Pada pengamatan 1000x lensa objektif harus diberi minyak imersi terlebih dulu untuk

memfokuskan cahaya.

Pembuatan olesan tidak boleh terlalu tebal, karena akan membuat sel bakteri bertumpuk

sehingga sukar untuk menentukan bentuk sel secara individu.

Pensuspensian harus merata dan tipis supaya pengamatan bakteri mudah, terutama pada

medium padat cenderung saling melekat dengan sesamanya

PEWARNAAN ZN

- Pewarnaan ZN disebut juga pewarnaan tahan asam

- ZN positif ditunjukkan dengan warna merah, sedangkan ZN negatif berwarna biru.

- Staphylococcus aureus memberikan ungu, yang berarti bakteri ini termasuk ke dalam ZN

negatif. Sehingga dapat disimpulkan bakteri ini tidak tahan asam

- Pemanasan menyebabkan zat warna mudah masuk.

- Letak spora pada bakteri ada tiga yaitu terminal,subterminal dan sentral. Adanya spora

ditunjukkan dengan warna hijau.

24

Page 25: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

Ukuran dan letak endospora di dalm sel merupakan ciri-ciri yang digunakan untuk

membedakan spesies-spesies bakeri yang membentuknya. Bacillus subtilis tergolong pada jenis

bacillus yang dapat membentuk suatu struktur dalam sel pada tempat- tempat yang khas disebut

endospora. Spora dapat diamati dengan pewarnaan spora terlihat spora berwarna hijau dan letak

spora pada sel vegetatif terletak pada sentral, terminal, dan subterminal

Endospora pada Bacillus dapat membuat bakteri Bacillus bertahan hidup dalam keadaan

kekurangan nutrient, tahan terhadap panas dan unsur-unsur fisik lainnya seperti pembekuan,

kekeringan, radiasi ultraviolet serta terhadap bahan-bahan kimia sehingga dibutuhkan usaha yang

keras untuk mewarnai spora dengan pewarna khusus untuk dapat menembus endospora serta

pemanasan yang cukup untuk memuaikan spora agar pewarna bisa masuk.

25

Page 26: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

DAFTAR PUSTAKA

Budiyanto, Moch. Agus Krisno. 2002. Mikrobiologi Terapan. Malang : Universitas

Muhammadiyah Malang.

Drs. Koes Irianto. 2006. Mikrobiologi : Menguak Dunia Organisme. Bandung :

Penerbit Yrama Widya.

Entjang Indan. 2003. Mikrobiologi dan Parasitologi. Bandung: PT. Citra Aditya Bakti.

Michael,j.Pelczar,jr,E.S.C Chan, Merna Foss Pelczar 1986.Dasar-Dasar

Mikrobiologi.Jakarta:UI-Press

Gerard Bonang,Enggar S.Koeswardono 1982.Mikrobiologi kedokteran:Untuk

Laboratorium dan Klinik.Jakarta:Gramedia.

Hadioetomo & Ratna Siri. 1990. Mikrobiaologi Dasar dan Praktek. Jakarta: PT

Gramedia.

Bibiana. 1992. Mikrobiologi. Jakarta : CV. Rajawali

Dwijosepotro, D. 1978. Dasar-Dasar Mikrobiologi. Jakarta : Djambatan.

Entjang, Indah. 2003. Mikrobiologi dan Patofisiologi Untuk Akademi Keperawatan

dan Sekolah Tenaga Kesehatan yang Sederajat. Bandung : PT. Citra Aditya Bakti.

FK Universitas Indonesia. 1993. Mikrobiologi Kedokteran. Jakarta : FK Universitas

Indonesia.

Gupte, Satish. 1982. Mikrobiologi Dasar edisi 3. Jakarta : Binarupa Aksara

Staff Pengajar Fakultas Kedokteran Universitas Indonesia. 1993. Mikrobiologi

Kedokteran. Jakarta : Binarupa Aksara.

Waluyo, Iud. 2004. Mikrobiologi Umum. Malang : Universitas Muhammadiyah.

26

Page 27: Lap. Mikro (Pengecatan ZN & Spora)BARU

27