Cara Pengawetan Fungi

7/22/2019 Cara Pengawetan Fungi

1/43

CaraPengawetandanPenyimpanan

BiakanFungi

Marlia Singgih Wibowo

School of Pharmacy

Institut Teknologi Bandung


2/43

Outline

Prinsip Umum

Teknik Pengawetan (Preservation)

Keuntungan dan Kerugian

Pemilihan Metode


3/43

PrinsipUmum

Tujuan utamamemelihara biakan

suatu fungus adalah

untuk menjaga galur

fungus tersebut di

dalam suatu media

tanpa terjadi nya

perubahan morfologi,fisiologi, atau genetik


4/43

PrinsipUmum

Organisme dapat

berasal dari

berbagai sumber

Contoh :

Penicillium

digitatum


5/43

PrinsipUmum

Teknik pengawetan sangat bervariasi, dapat

dengan mengurangi kecepatan metabolismeatau bahkan dapat menunda metabolismemikroorganisme

Pengawetan yang baik bila digunakan biakan

yang sehat dan kondisi pertumbuhan yangoptimum

Microorganisme tumbuh dalam lingkungan dankondisi yang berbeda-beda

Beberapa diantaranya memiliki spesifisitastertentu sebagai syarat pertumbuhannya


6/43

PrinsipUmum

UmumnyaMikroorganisme

tumbuh baik dalam

media yang dibuat

mendekati kondisilingkungan tempat

asalnya

Contoh : tanah,bagian tanaman atau

komponen air, dll.


7/43

Pertumbuhan

Mikroorganisme Media pertumbuhan dapat bervariasi.

Misalnya Raper & Thom (1949)

menggunakan Czapek's Agar, Steep Agarand Malt Extract Agar untuk pertumbuhanPenicillia danAspergilli

Pitt (1980) menganjurkan penggunaan

recommends Czapek Yeast Autolysate (CYA)dan Malt Extract Agar (MEA) untuk penicillia

Standarisasi of formula media pentingdilakukan

Media akan mempengaruhi morfologi danwarna koloni, karena kandungan media akanmempengaruhi pembentukan senyawa

tertentu atau menginduksi sifat tertentu darimikroorganisme


8/43

Pertumbuhan

Pengaruh Media terhadap morfologi koloni


9/43

Kontaminasipada

kultur

fungi

Biakan Fungi sering terkontaminasi olehTyroglyphus orTarsonemus

Di alam banyak terdapat pada tanah, danhampir semua bahan organik

Terbawa ke laboratorium dari bahan

tanaman, produk yang sudah kadaluarsa,pada sepatu, serangga atau biakanmikroorganisme lain.

Cepat berkembang biak dalam keadaan

lembab dan suhu ruang Biakan fungi menjadi rusak dan tidak dapat di

simpan


10/43

Pencegahan

Kontaminasi Melakukan pekerjaan sesuai prosedur Menjaga kebersihan dan kesehatan diri Selalu memeriksa setiap barang yang masuk ke laboratorium Menutup setiap biakan atau barang yang digunakan sesuai prosedur


11/43

Metodepencegahankontaminasi

Hygiene

Bersihkan seluruh permukaan dan hindari

biakan dari udara luar dan debu Cuci peralatan dengan desinfektan yang

sesuai.

Fumigation Digunakan selang waktu tertentu untuk ruanglaboratorium atau korikor. Pekerjaan ini harusdilakukan oleh yang berwenang

Mechanical and chemical barriers Universal bottles, kapas lemak, tube

bersumbat


12/43

Metodepencegahan

kontaminasi

Tempat penyimpanan yang aman

Lemari pendingin 4-8C Lemari penyimpanan deep freeze (< -

20C)

Menutup kultur dengan minyak mineral

Simpan dengan silica gel

Freeze-dry

Simpan di ultra-low temperatures case


13/43

Pengawetandan

Penyimpanan

Continuous culture

Pada media padat atau cair

Refrigeration

Di bawah lapisan minyak mineralDi dalam air

Pengeringan

Freeze drying

Cryopreservation


14/43

PengawetandanPenyimpanan

Bagi biakan awal dan simpan 1 biakan

sebagai seed stock

Simpan satu biakan sebagai cadangan

Setelah pengawetan, viability, purity, dan

identitas harus di cek ulang dan dibandingkan

dengan data aslinya atau referensi

Morfologi, patogenitas, sifat-sifat fisik dan

biokimia harus diuji

Semua pengamatan harus dicatat dan

disimpan untuk referensi di masa yad.


15/43

Metode

Pengawetan

mikroorganismePenumbuhan pada agar miring

Metode yang paling mudah dan murah

Disimpan di dalam lemari pendingin

dapat membantu mengurangi frekuensi

sub-kultur


16/43

Metodepengawetanmikroorganisme

Kerugian metode sub-kultur pd agar

Kemungkinan terjadi variasi genetikakibat pemindahan berulang, hilangnya

sifat patogenitas atau karakteristik

fisiologi dan morfologi lainnya Kemungkinan kontaminasi besar

Memerlukan pengawasan yang ketat

supaya biakan tidak tertukar atau

terkontaminasi


17/43

PengawetandanPenyimpanan

Keuntungan metode sub-kultur pada agar :

Koleksi biakan dapat disimpan dalam waktucukup lama dibawah pengawasan ahlinya.

Metodenya cukup murah dan tidakmemerlukan teknisi khusus. Untuk jumlah

koleksi yang sedikit, metode ini cukupmenguntungkan

Penumbuhan mudah karena tidak perluwaktu adaptasi yang lama.

Periode pemindahan : 2 4 minggu atau2 4 bulan


18/43

Dibawahminyakmineral

Biakan di atas agar miring di dalam 30 ml universal bottles laludituangkan minyak mineral di atasnya. Hal ini dapat mencegahdehidrasi dan memperlambat aktivitas metabolisme danpertumbuhan karena kurangnya tekanan oksigen


19/43

PengawetandenganMinyakmineral

Metode ini pertama kali digunakan oleh Buell &Weston (1947)

Biakan sehat yang cukup usianya ditutup dengan 10mm minyak mineral steril (liquid paraffin or medicinalparaffin dengan specific gravity 0.830-0.890).

Minyak disterilkan dengan autoklaf dua kali pada121C selama 15 menit

Penumbuhan kembali dari minyak dilakukan dengancara mengambil sejumlah koloni dengan jarum

biakan dan minyak dibuang sebanyak mungkin. Cara menginokulasi agar di posisi tengah-tengah

kadangkala memberikan hasil yang lebih baiksehingga minyak dapat dikeluarkan dengan mudahmelalui slope


20/43

PengawetandalamMinyakmineral

Kerugian penyimpanan dalam minyak mineral : Kontaminasi oleh spora mikroba dari udara

Hambatan pertumbuhan pada saat retrieval

Pertumbuhan terus terjadi di bawah kondisiyang tidak nyaman dapat mengarah padamutasi


21/43

PengawetandalamMinyakmineral

Keuntungan :

Peralatan murah dan pengerjaan mudah Beberapa mikroorganisme hanya dapat

disimpan di dalam minyak mineral

Namun penyimpanan di bawah minyak mineraldisarankan untuk laboratorium yang memiliki

keterbatasan sumbar daya dan fasilitas


22/43

PenyimpanandalamairPotongan agar atau suspensi spora dapat disimpan dalam air


23/43

PenyimpanandalamairCara :

1. Potongan agar ukuran 6 mm diambil dariujung pertumbuhan koloni jamur

2. Potongan tsb ditempatkan di dalam air steril

di dalam botol McCartney dan tutup erat , laludisimpan pada suhu 20-25C.

3. Peremajaan dilakukan dengan mengambilpotongan agar tsb, tempatkan terbalik pada

medium pertumbuhan yang sesuai


24/43

Penyimpanandalamair Jangka waktu penyimpanan dapat

mencapai 2-3 tahun , misalnya untukspesies of Phytophthora dan Pythium

tanpa adanya perubahan fisik

(Onions & Smith, 1984).


25/43

Penyimpanandalam

air

Pertama kali dilakukan oleh Castellani (1939,1967) yang menyimpan fungi yang patogen

thp manusia Figueiredo (1967) menyimpan 22 patogentanaman tanpa kehilangan patogenitasnya.

Figueiredo & Pimentel (1975) melaporkan

penyimpanan dalam air bisa mencapai 10years

Boeswinkel (1976) menyimpan 650 patogena.l. Oomycota,Ascomycota, Basidiomycotadan mitotic fungi selama 7 tahun.

Ellis (1979) menyimpan Entomophthorales,Pyrenomycetes, Hymenomycetes,

Gasteromycetes dan Hyphomycetes


26/43


27/43

Responseofcellstofreezing. Slowcool:cellscanmaintaingosmosticequilibriumbywaterefflux;thuscellsshrinkandonlyextracellulariceforms. Rapidcool:cellscannotlosewaterrapidlyenoughtomaintainosmoticequilibrium;thuscellsshrinkslightlyandcontainafewlargeice

crystals.

Very

rapid

cool:

cellscontain

a

large

number

of

small

ice

crystals.

SLOW

COOL

RAPID

COOL

VERY

RAPID

COOL

-2OC

-5OC

< -

10OC

What happens to a cell

when it freezes?


28/43

Penyimpanandalam

Silica

Gel

Sporulating fungi dpt disimpan selama 7-18 tahun

C.F. Roberts, University of Leicester menyimpan fungilebih dari 25 years menggunakan metode dari Perkins

(1962), semua galur terbukti stabil.


29/43

PenyimpanandalamSilicaGel

Cara :

1. Sepertiga penuh botol universal 30 ml isi dengan silica gel dansterilkan dengan dry heat (180C selama 3 jam).

2. Tempatkan botol di dalam rak dengan air dan bekukan (nominal- 20C).

3. Siapkan suspensi spora di dalam 5% (w/v) skimmed milk yang

telah didinginkan.4. Tambahkan kira-kira 1 ml biakan tersebut ke dalam silica geldan goyangkan agar tercampur homogen.

5. Simpan botol dengan tutup longgar selama 10-14 hari pada25C sampai silica gel crystals mengering dan siap untukdipisahkan.

6. Kencangkan tutupnya dan simpan botol pada 4C dalam wadahkedap udara dengan indicator silica gel untuk mengabsorbsilembab.


30/43

PenyimpanandalamSilicagel

Banyak fungi yang tahan lama denganmetode ini (Perkins, 1962; Ogata, 1962;

Onions, 1977; Smith & Onions, 1983). Spora yang berdinding tipis cenderung tidak

dapat bertahan.

Keberhasilannya tergantung biakan yangsehat, dan hal ini dapat ditunjukkan dariperbedaan biakan dari setiap isolat.

Metode ini dpt digunakan bila fasilitas freeze-

drying tidak tersedia, walaupun ada bbrpfungi yang tidak dapat bertahan lama dgncara ini.


31/43

PenyimpanandalamSilicaGel

Penumbuhan kembali dgn cara menyebarkan beberapa

kristal ke dalam medium pertumbuhan yang sesuai


32/43

Penyimpanandalam

Silica

Gel

Kekurangan cara silica gel :

Hanya terbatas pada sporulating fungi, dan tidaksesuai untuk Pythium, Phytophthora dan

beberapa Oomycota, juga beberapa fungi

bermiselium yang memiliki spora yangkompleks.

Kemungkinan terjadinya kontaminasi cukup

besar setelah beberapa kali peremajaan.


33/43

Penyimpanan

dalam

Silica

Gel

Keuntungan cara silica gel :

Murah dan sederhana Menghasilkan biakan yang stabil untuk

banyak sporulating fungi termasukBasidiomycota.

Kontaminasi dari bakteri dapat dihindarikarena kondisi yang kering

Peremajaan inokulum dapat dilakukan

dengan mengmbil beberapa butir dari satubotol, walaupun disarankan tetapmemisahkan biakan stock dari biakan kerja.


34/43

Penyimpanan

dalam

tanah

Tanah harus diautoklaf dua kali (121 C for 15 min)

sebelum diinokulasi dengan 1 ml suspensi sporadalam air steril

Inkubasi pada 20-25 C selama 5-10 days tergantungpada laju pertumbuhan fungi


35/43

Penyimpanandalam

tanah

Fusarium (Gordon, 1952; Booth, 1971)

Atkinson (1953) menyimpan Rhizopus, Alternaria,Aspergillus, Circinella danPenicillium.

Patogenitas Septoria dari sereal setelah 20 bulantetap tinggi (Shearer et al., 1974) dan jugaPseudocercosporella selama 1 tahun (Reinecke &Fokkema, 1979).

Gordon's collection menunjukkan bahwa 76% isolatFusarium equiseti, 75% F. semitectum dan 50% F.acuminatum tumbuh tidak terkendali (Booth, 1971).

Penyimpanan dalam tanah sebaiknya digunakanuntuk Fusarium dibandingkan di dalam minyakkarena adanya perubahan (variasi) terjadi dalamminyak.


36/43

Penyimpanandalam

tanah

Keuntungan :

Biakan dapat bertahan sampai 10tahun.

Peremajaan berulang dapat dilakukan

dari sampel yang sama, walaupun

sebaiknya stok harus ditempatkan

terpisah. Biaya murah dan alat sederhana


37/43

Penyimpanandalam

tanah

Kerugian :

Kemungkinan terjadi variasi genetik

Beberapa fungi tidak dapat tahan di

desikasi Kemungkinan kontaminasi lebih besar


38/43

Oomycota Paling baik disimpan di bawah nitrogen cair

dengan kecepatan pendinginan 10C min-1,walaupun beberapa galur tidak dapat disimpandengan cara ini.

Di bawah minyak mineral dapat disimpan

sampai 6 bulan Tiga galur Phytophthora dapat tahan sampai 40tahun (laporan dari CABI-UK)

Kultur dapat disimpan dalam air namun perlu di

transfer setiap 2 tahun


39/43

Zygomycota

Nitrogen cair sangat disarankan untuk

penyimpanan Mucor, Rhizopus dan genuslainnya

Dapat pula dengan cara freeze-dried

Tidak semua genus tahan proses dehidrasi,terutama dengan silica gel, misalnyaCoemansia, Martensiomyces, Condiobolus,Entomophthora, Piptocephalis and Syzygites.

Dari genus2 ini, hanya Piptocephalis danCoemansia yang dapat di freeze dried.


40/43

Basidiomycota

Umumnya tumbuh dalam bentuk miselium Fungi

demikian hanya dapat disimpan dengan caratransfer regular pada agar dengan atau tanpaminyak, atau disimpan di nitrogen cair.

Fungi tersebut menghasilkan dinding hifa yang

tebal jadi mudah di freeze-dried tetapi sukarditumbuhkan kembali

Basidiospores yang diperoleh dari fungi yang

tumbuh di alam, dapat di freeze-dried


41/43

FungiDeuteromycota

Fungi yang ber konidia reltif mudah di

simpan Freeze-drying adalah teknik yang paling

tepat.

Aspergillus, Penicillium and Paecilomycesdapat disimpan mulai dari 6 bulan sampai2 tahun pada agar miring pada -18C.


42/43

Ragi

Ragi (single celled vegetative yeasts)

dapat disimpan dengan cara freeze-drying.

Kebanyakan spesies dapat tahan

disimpan dalam silica gel namun sukarditumbuhkan kembali

Liquid nitrogen adalah cara yang paling

baik.


43/43

Rangkumane o os a y ongev y

Cryopreservationbelow 130

oC

High Excellent >10 000years

Freeze-drying High Little change

reported

4-40 years

Silica gel Low Little changereported

5-20 years

Water Low Variation linkedto storage time

2-7 years

Soil Low Variationcommon 5-20 years

Oil Low Changeexpected withtime

1-50 years

Growth 18-22oC Low-Medium Change

expected with

time

2 weeks to6 months

Growth 4-7oC Medium Change

expected withtime

6-12months

Date post:	10-Feb-2018
Category:	Documents
Author:	yulis-adriana
View:	217 times
Download:	0 times

Cara Pengawetan Fungi

Documents

KAYU DAN BAMBU - · PDF fileDengan pengawetan kayu, ... borax, asam borat, dll. Konsentrasi larutan 5 – 10 %. b. ... Cara pengawetan yang paling sederhana dan menghasilkan pengawetan

PENGAWETAN JENAZAH.pptx

Cara Pengawetan dan Penyimpanan Biakan Fungidownload.fa.itb.ac.id/filenya/Handout Kuliah/Mikrobiologi Obat dan... · Tempat penyimpanan yang aman ... Pengawetan dan Penyimpanan Continuous

Biologi : Fungi

96103102 Sterilisasi Dan Pengawetan Bahan Makanan Dengan Cara Radiofarmasi

Cara Pengawetan

Hongos- Fungi

Kingdom Fungi

Jamur / Fungi

FUNGI (JAMUR)

FUNGI Aplikom

PENGARUH AWAL PEMANFAATAN OLI DAN BRIKET …core.ac.uk/download/pdf/11067200.pdf · Cara pengawetan kayu dapat dilakukan dengan berbagai cara. 1) Pengawetan kayu basah: Peleburan,

Pengawetan Makanan - Pengawetan Makanan Dan Permasalahannya

FUNGI (Picture)

Fungi preview

Pengawetan pangan (cara lain)

DUNIA FUNGI

Anamorfic Fungi